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药品中有关物质HPLC方法验证(中英文3/3)

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药士
发表于 2014-4-6 21:07:56 | 显示全部楼层 |阅读模式

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3.3.6 Range 范围

ICH definition: The range of an analytical procedure is the interval between the upper and lower concentrations (amounts) of analytes in the sample (including these concentrations) for which it has been demonstrated that the analytical procedure has a suitable level of precision, accuracy, and linearity (Figure 3.13).

ICH定义:分析方法的范围是指样品中(包括这些浓度)被分析物质的最高和最低浓度(数量)的区间,要证明分析方法在此区间具有适当水平的精密度、准确性和线性(见图3.13)。



3.13 范围

Typically, linearity and accuracy determination covers a wide concentration range (e.g., 50% of the ICH reporting limit to 150% of specification). However, the concentration range for precision will be limited by the availability of sample of different related substance levels. Therefore, to ensure an appropriate method validation range with respect to precision, it is critical to use samples of low and high levels of related substance in precision experiments (e.g., fresh and stressed samples).

典型情况是,线性和准确度测试覆盖一个较宽的浓度范围(例如ICH报告限的50%至质量标准的150%)。但是精密度的浓度范围会受到不同有关物质水平的样品是否可以获得的限制。因此,要保证精密度试验具有适当的方法验证范围,关键是在试验中使用含有较高和较低水平的有关物质的样品(例如,新鲜的和强降解的样品)。

3.3.7 Robustness 耐用性

ICH definition: The robustness of an analytical procedure is a measure of its capacity to remain unaffected by small but deliberate variations in method parameters and provides an indication of its reliability during normal use.

ICH定义:分析方法的耐用性是其它保持不受方法参数的较小变化影响的能力,说明其中常规使用中的可靠程度。

General Considerations. This is to verify that the method performance is not affected by typical changes in normal experiments. Therefore, the variation in method conditions for robustness should be small and reflect typical day-today variation. Experimental design (e.g., Plackett–Burman screening, factorial design) is very useful to investigate multiple parameters simultaneously. Critical parameters are identified during the method development process. Only these critical method parameters should be investigated for robustness. Common critical method parameters can be divided into two categories:

一般考虑。该试验是为了确认方法表现不会受到常规检测中一些典型的变化的影响。因此,耐用性试验中的条件变动应较小,反映较为典型的常规变动。试验设计(例如,Plackett–Burman 筛选试验,因素设计)对于调查多因素模拟非常有用。在方法开发阶段,要对关键参数进行识别。耐用性试验只需要对这些关键参数进行调查。一般关键参数分为两类。

1. HPLC conditions

HPLC条件

a. HPLC column (lot, age, brand)

色谱柱(批号、使用时长、品牌)

b. Mobile-phase composition (pH ± 0.05 unit, percent organic ± 2%)

流动相比例(pH ± 0.05 unit, 有机相百分比 ± 2%

c. HPLC instrument (dwell volume, detection wavelength ± 2 nm, column temperature ± 5?C, flow rate)

HPLC仪器(死体积、检测波长± 2 nm,柱温± 5?C,流速)

2. Sample preparation样品制备

a. Sample solvent (pH ± 0.05 unit, percent organic ± 2%)

溶剂(pH ± 0.05单位,有机相比例 ± 2%

b. Sample preparation procedure (shaking time, different membrane filters)

样品配制程序(振摇时长,不同孔径过滤膜)

c. HPLC solution stability

HPLC溶液稳定性

Other Considerations. Typically, the variations in robustness results are compared to the intermediate precision results to demonstrate that robustness is not affected significantly within normal day-to-day variation. When the related substance results are affected by some critical experimental parameters, a precautionary statement needs to be included in the procedure to ensure that this parameter is tightly controlled between experiments. For example, if percent organic of mobile phase affects the results significantly, the procedure should indicate the acceptable range for percent organic (e.g., 50% organic ± 2%)

其它考虑。一般来说,耐用性试验中的结果要与中间精密度结果进行比较,以证明在常规的不同天检测中,耐用性并不会受到显著影响。如果有关物质结果受到一些关键试验参数的明显影响,则在检验方法中要写明注意事项,以保证这些参数严格控制在范围内。例如,如果流动相中有机相比例会对结果形成显著影响,则检验方法中要注明有机相的可接受范围(例如,50%有机相± 2%)。

Built-in Robustness in Method Procedure. The following are some suggestions to improve method robustness:

分析方法自身耐用性。以下是如何改善耐用性的一些建议。

? Weighing error. Weighing error is usually the main source of error. Analytical procedure should ask for a weighing sample or standard of more than 10 mg to minimize weighing error. In addition, use two to three independent weighings in the standard curve and verify the nominal responses of these standard preparations to ensure that there is no significant weighing error. Alternatively, use area percent calculation to eliminate the need for weighing a small quantity of reference standard.

称重误差。称量误差一般是误差的主要来源。分析方法所要求的称样量,或对照品称样量应大于10 mg以减少称量误差。另外,在标准曲线中使用2-3个单独的称量,确认这些标准制备的名义响应值,以保证不会发生较大的称量误差。也可以采用面积百分比计算来消除对照品微量称量的需求。

? Dilution error. Pipette a volume of more than 5 mL, and avoid using volumetric flasks of less than 25 mL.

稀释误差。移液体积应大于5ml,避免使用少于25ml的容量瓶。

? Sonication. The efficiency of sonication is highly variable and depends on various factors (e.g., condition of the sonication bath, level of water, and position of flask in the sonication bath). Mechanical shaking is recommended, instead, and is much more reproducible.

超声。超声的效果具有高度不确定性,依赖于不同因素(例如超声浴池的条件、水位、容量瓶在超声浴池中放置的位置)。推荐采用机械振摇,因为其更具有重现性。

? Mobile phase as sample solvent. If possible, always use mobile phase as the sample solvent. This ensures the composition (e.g., percent organic, pH) of sample solution matches that of mobile phase and reduces the chance of any problem due to incompatibility of sample solvent and mobile phase.

流动相作为样品溶剂。应尽可能采用流动相作为样品溶剂,这样保证样品溶液的比例(例如有机相百分比,pH值)与流动相比例相当,减少由于样品溶剂与流动相不相容而产生问题的可能性。

Alternatively, always use sample solvent weaker than that of the mobile phase to ensure that the chromatography is not deteriorated. For example, in reversed-phase HPLC, use less organic solvent in the sample solvent than in the mobile phase.

所以,常常采用比流动相更弱的溶液作为样品溶剂,以保证色谱不会变差。例如,在反相HPLC中,样品溶剂使用有机溶剂比流动相更少。

? Buffer. Ensure that the buffer (pKa) is appropriate for the pH of the solution.

缓冲液。保证缓冲剂(pKa)与溶液的pH值相当。

In general, to provide appropriate buffering capacity, the pH of the solution should be within ±1 pH unit of the pKa value of the buffer.

一般为了提供适当的缓冲能力,缓冲液的pH值应在缓冲物质的pKa值的±1 pH单位内。

? Isocratic method. Whenever possible, use isocratic HPLC condition, as this is affected less by the variation in flow rate, temperature, and dwell volume.

等度方法。只要可能,应使用HPLC等度条件,因为等度条件受到流动速度、温度、死体积的影响会更小。

If gradient HPLC conditions have to be used, a simple linear gradient is preferred over multistep gradients. Complicated gradient conditions are more susceptible to differences between HPLC instruments (e.g., flow rate, dwell volume).

如果采用了HPLC梯度条件,则线性梯度优先于多步梯度。复杂的梯度条件在不同HPLC仪器上会产生更多差异(例如,流速、死体积)。

3.4 COMMON PROBLEMS AND SOLUTIONS 常见问题和解决方法

1. Presentation of method validation data. Table 3.2 provides a quick overview of the validation data.

方法验证数据列表。表3.2中列出验证数据。

2. System suitability. During the robustness testing of method validation, critical method parameters such as mobile phase composition and column temperature are varied to mimic the day-to-day variability. Therefore, the system suitability results from these robustness experiments should reflect the expected range for the system suitability results. As a result, system suitability results in these method validation experiments are very useful in determining the system suitability acceptance criteria. This is a very effective approach since the required system suitability results can be generated during method validation and no other special study is required. However, these results reflect the expected performance of the system, but not necessarily the minimum performance standard for acceptable results. For example, the minimum resolution of the critical pair from method validation may be 3.5; however, a resolution of 2.0 may still be acceptable as long as they are baseline resolved and all other chromatographic parameters remain acceptable.

系统适用性。在方法的耐用性测试中,关键方法参数,例如流动相比例和柱温进行了变动,以模拟不同天变化。这时,这些耐用性试验的系统适用性结果反映了系统适用性所期望的范围。该验证试验所得到的系统适用性结果对于决定系统适用性可接受标准非常有用。这种方法非常有效,因为所要求的系统适用性结果可以在方法验证中产生,不需要进行其它特殊的研究。但是,这些结果反映的是对系统表现的期望,而不是可接受结果的最低表现标准。例如,方法验证中关键相邻峰最小分离度为3.5,但只要保证基线分离,所有其它色谱参数可以接受,分离度为2.0时仍可以接受。





3.2 验证结果总结

ICH验证项目
分析
验证结果
专属性
典型图谱证明专属性
所有原料药和主要有关物质(AB)能彼此分离。辅料对检测无明显干扰。
线性
回归分析数据
(线性相关系数、Y轴截距、斜率、残差平方和)和绘图。
线性对A在名义样品浓度0.05-1.0%范围评估,B在名义样品浓度0.05%-2.0%范围评估
回归分析数据:
物质             A       B
相关系数          1.000   1.000
Y轴截距          0.022   -0.013
(有关物质%
斜率(面积       87.2     275.3
单位/有关物质%
残差平均和        177.8    1290.7
范围
具备线性、准确度、精密度可接受度时分析物质的浓度范围
验证范围
A 0.1-0.4%
B 0.05%-1.0%
准确度
采用A0.1-0.4%之间,B0.05%-1.0%之间的3个浓度9次检测来评估
物质         准确度%
A            90-100%
B            92-105%
精密度
各原料药中单个和总有关物质(TRSs)的平均值和标准偏差报告为各自精密度。方法总体精密度采用合并变量因素分析方法进行评估。
重复性
           平均值       标准偏差
         n=16)(%    %
A         0.11           0.001
B         0.08           0.002
TRSs      0.18           0.013
中间精密度
           平均值       标准偏差
         n=16)(%    %
A         0.11           0.005
B         0.08           0.020
TRSs      0.15           0.030
检测限(DL
定量限(QL
基于有关物质在样品中的稀释溶液,按以下公式计算检测限和定量限
DL(以名义样品浓度的%计)=标准偏差)/斜率
DL(以名义样品浓度的%计)=10×标准偏差)/斜率
检测限和定量限测得分别为0.0040.02%
定量限(0.02%)低于对应的ICH报告限阈(0.1%)。
耐用性
流动相典型变量:pH值、有机相比例、SDSEDTA浓度
样品配制典型变量:pH值、有机相比例、SDS浓度、样品量、样品处理、EDTA浓度
耐用性试验结果采用统计学进行分析。
基于流动相和样品配制评估因素主要影响性分析,所有试验参数的变化对检验方法无显著影响。
5?C和室温下标准溶液稳定性和样品溶液稳定性
样品溶液在4-5小时内室温下稳定,5?C 50小时(约2天)内稳定。标准溶液室温下24小时内稳定,5?C7天内稳定。

SDS:十二烷基硫酸钠

EDTA:乙二胺四乙酸

REFERENCES 参考文献

1. FDA Guidance for Industry; Analytical Procedures and Methods Validation (draft), 2000.

FDA行业指南,分析方法和方法验证(草案),2000

2. ICH Harmonized Tripartite Guideline, ICH Q2A, Text on Validation of Analytical Procedures, Mar. 1995.

ICH指南,ICH Q2A,分析方法验证正文,19953

3. ICH Harmonized Tripartite Guideline ICH Q2B, Validation of Analytical Procedures: Methodology, May 1997.

ICH指南,ICH Q2B,分析方法验证,方法学,19975

4. ICH Harmonized Tripartite Guideline ICH Q3B(R), Impurities in New Drug Products, Oct. 1999.

ICH指南,ICH Q3B (R),新制剂中的杂质,199910

5. United States Pharmacopoeia, USP 25, Chapter <1225>, Validation of Compendial Methods.

美国药典USP25<1225>,药典方法的验证

6. Snyder, J. Kirkland, and J. Glajch, Practical HPLC Method Development, 2nd ed., Wiley, New York 1997.

实用HPLC方法开发,Snyder, J. Kirkland, and J. Glajch, 第二版本,纽约,1997


----------转自Julin


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发表于 2014-4-6 21:18:57 | 显示全部楼层
楼主辛苦了,谢谢分享!
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药徒
发表于 2014-4-6 22:46:32 | 显示全部楼层
不赞都不行啦,辛苦喽{:soso_e181:}
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药徒
发表于 2014-4-6 22:57:31 | 显示全部楼层
学习了{:soso_e181:}
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药士
发表于 2014-4-7 06:08:32 | 显示全部楼层
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药徒
发表于 2014-4-7 10:12:43 | 显示全部楼层
谢谢楼主!
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药徒
发表于 2014-4-7 11:29:54 | 显示全部楼层
谢谢楼主!
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药士
发表于 2014-4-7 11:50:35 | 显示全部楼层
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药徒
发表于 2014-5-23 15:12:39 | 显示全部楼层
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药徒
发表于 2014-10-22 16:02:36 | 显示全部楼层
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