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病毒灭活/去除工艺与血液制品病毒安全性

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药徒
发表于 2016-1-23 23:02:17 | 显示全部楼层 |阅读模式

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不升级什么也干不了病毒灭活/去除工艺与血液制品病毒安全性
血液制品是以健康人血浆为原料,采用分离、纯化技术或生物工程技术制备的有生物活性的制品。在医疗急救及某些特定疾病,特别是与血液有关疾病的预防和治疗中,具有不可替代的作用。由于使用的原料是人血浆,因此血液制品难免具有传播血源性病毒的可能性。上世纪90年代中期,国外报道了因筛选试剂改变和缺乏有效的病毒灭活步骤,导致患者输注静注人免疫球蛋白(IVIg)后发生丙肝病毒(HCV)传播的事件[1];并且近年来还出现过热处理后的凝血因子类制品也传播人细小病毒B19的事件[2]。与此同时,世界各国目前担心血液制品存在传播克雅病痴呆病变异病毒(CJDv)的危险性。为此,国内外有关机构纷纷制定了确保血液制品病毒安全性的法规[3—5],其中病毒灭活/去除技术发挥着尤为重要作用[6]。我们从生产的角度,对病毒灭活和去除工艺在血液制品生产中的应用做一综述,以期为国内同行在相关制品的研究和生产方面提供一些理论参考。
1 病毒去除方法
1.1 乙醇沉淀 现有的血浆蛋白分离方法主要是以Cohn EJ教授等人于上世纪40年代开发的低温乙醇法为基础,结合现代层析技术衍生出来的生产工艺。在低温条件下,乙醇既是蛋白沉淀剂,也发挥着去除病毒的作用。Biesert等[7]在验证乙醇对脂包膜病毒[人类免疫缺陷病毒1(HIV1)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus)、伪狂犬病病毒(PRV)、柯萨奇病毒(CVB6)]和非脂包膜病毒[脊髓灰质炎病毒(Polio1)和猿猴空泡病毒40(SV40)]的去除效果时,发现该方法对上述病毒的去除能力分别达到>550、>636、>728、>270、>380 和>551 log10。Baxter公司的研究人员选取牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、HIV1及PRV等脂包膜病毒,与HAV、猪细小病毒(PPV)等非脂包膜病毒,做低温乙醇沉淀的病毒验证工作,结果显示不同的组分分离都能实现病毒的去除,并且对非脂包膜病毒也能很好地去除(表1)[8]。此外,低温乙醇在去除传染性海绵状脑病(TSE)和朊病毒(PrPSc)上也发挥明显的作用,Lee等[9]在考察低温乙醇工艺对TSE和PrPSc的去除能力时,发现冷沉淀、冷沉淀+PEG、组分Ⅱ+Ⅲ、组分Ⅲ、组分Ⅳ1、组分Ⅳ1+PEG和组分Ⅳ4各步骤对TSE的去除效果分别达到10、22、60、53、37 log10及≥5.4和4.6 log10,而使PrPSc滴度分别降低1.0、3.0log10及≥4.7、≥4.3、≥4.2、≥4.9和≥4.1 log10。
表1 乙醇沉淀去除脂包膜和非脂包膜病毒能力

  
步骤
  
  
   
去除能力(log10)
   
   
脂包膜病毒
   
   
非脂包膜病毒
   
   
BVDV
   
   
HIV1
   
   
PRV
   
   
HAV
   
   
PPV
   
   
  
冷上清/FrⅠ+Ⅱ+Ⅲ
  
  
1.2±0.0
  
  
5.8±0.0
  
  
4.6±0.5
  
  
1.9±0.8
  
  
1.4±0.1
  
  
FrⅠ+Ⅱ+Ⅲ/FrⅣ1
  
  
2.8±0.5
  
  
0
  
  
3.4±0.4
  
  
1.9±0.7
  
  
1.2±0.3
  
  
FrⅣ1/FrⅣ4
  
  
>2.4±0.1
  
  
≥4.4±0.5
  
  
>4.8±0.1
  
  
3.8±0.1
  
  
2.2±0.3
  
  
FrⅣ4/FrⅤ
  
  
0.2±0.2
  
  
≥5.0±0.5
  
  
>4.6±0.0
  
  
4.2±0.4
  
  
3.4±0.5
  
1.2 深层过滤 深层过滤是生物制品生产中常用的方法,通过机械过滤和电荷吸附将病毒去除。在低温乙醇工艺中,低pH环境使得病毒易吸附在过滤介质上而达到去除的效果。Trejo等[10]发现IVIg制备过程中深层滤器去除非脂包膜病毒PPV能力受辛酸浓度和pH影响,当辛酸浓度是15、20及26 mmol/L时,PPV滴度分别降低(2.5±0.0)、(3.3±0.3)及(2.9±0.4)log10;而pH为4.95、5.10及5.25时,PPV滴度分别降低(3.1±0.4)、(3.3±0.3)及(2.6±0.1)log10。van Hohen等[11]在研究深层滤器去除PrPSc时,也发现去除效果受pH影响,即成羊瘙痒症脑组织匀浆与Tris缓冲液的混合物进行深层过滤后,PrPSc的传染力只减少≤1.0 log10;此外高盐溶液将降低深层过滤对病毒的去除效果。Foster等[12]研究发现,不同型号深层滤器在IVIg和白蛋白生产中对异常朊蛋白PrPSc的去除能力也存在差异:在白蛋白的生产中,Seitz KS80型滤器处理组分Ⅴ时对PrPSc的去除能力≥4.1 log10,而CUNO Delipid 1型滤器的去除能力只有2.8 log10;在IVIg的制备过程中,组分Ⅰ+Ⅲ上清经Millipore AP20滤器处理后,可去除PrPSc 3.0 log10,而Seitz K200型滤器对组分Ⅱ中PrPSc的去除和降低能力则≥3.4 log10。因此,应根据工艺和处理原料的需要,选择合适的深层过滤设备用于实际生产中。
1.3 色谱 随着分离工艺的发展,层析技术已越来越多地应用到血浆蛋白的分离和提纯中,其中应用最广泛的是离子交换色谱和亲和层析色谱。Adcock等[13,14]研究白蛋白制备中色谱对HAV和HBV的去除效果时发现,DEAESepharose FF、CMSepharose FF和Sephacryl S200 HR 3种树脂对HBV的去除效果分别是<0.3、0.3和1.5 log10,而对HAV的去除效果分别为5.3、1.5和4.2 log10,可见不同类型色谱在去除病毒能力上存在差异。此外,缓冲液的种类和成分也对色谱去病毒效果有影响。Strauss等[15]的研究表明,随着缓冲液电导率的提高,QSFF离子交换色谱对鼠白血病病毒(XMuLV)、SV40和鼠细小病毒(MMV)清除能力逐渐降低,并且TrisNaCl、Tris醋酸钠和HEPES醋酸钠3种不同的缓冲溶液也对病毒的去除产生较大影响;为此,在实际生产中应对缓冲液的电导率和种类加以考虑。Norling等[16]对新的和多次使用的离子交换色谱进行去除病毒能力的验证,结果显示经过上百次的使用和处理后,3种离子交换色谱还是表现出很好的病毒去除能力;此外离子交换色谱还可达到去除PrPSc的能力(表2)。Foster等[17]发现在纤维蛋白原、凝血酶、凝血因子Ⅷ(FⅧ)、凝血因子Ⅸ(FⅨ)及凝血酶原复合物的制备中,离子交换色谱去除PrPSc能力可分别达到≥3.5、3.0、3.1、3.0和3.0 log10。
     亲和层析色谱是建立在目的蛋白质与固定化配基之间特异性、可逆相互作用基础上的蛋白分离技术,由于对目的蛋白具有高选择性和高收率等特点,亲和色谱在病毒去除上也有很好的潜力。Lawrence等[18]发现FⅧ︰C免疫亲和层析色谱可使EMCV和Sindbis病毒传染性分别降低4.0 log10。Tomokiyo等[19]同样发现抗FⅦ 单克隆抗体免疫亲和色谱具有显著的去除病毒能力,Sindbis和Polio病毒的去除效果分别达到4.4和2.8 log10。由此可见,亲和色谱能较好的保证制品的病毒安全性。
表2 新的和多次使用的离子交换色谱对SV40、MVM病毒的去除

  
树脂
  
  
使用次
  数(次)
  
  
处理溶液
  
  
   
log10降低值
   
   
MMV
   
   
SV40
   
   
  
QSepharose fast flow
  
  
0
  
  
  
  
≥5.12±0.21
  
  
≥4.28±0.14
  
  
  
  
198
  
  
0.5 mol/L NaOH
  
  
≥5.06±0.07
  
  
≥4.41±0.08
  
  
  
  
124
  
  
0.1 mol/L HCl
  
  
4.15±0.13
  
  
3.33±0.33
  
  
  
  
84
  
  
  
  
4.45±0.13
  
  
3.96±0.08
  
  
QCeramic Hyper D
  
  
0
  
  
  
  
≥5.22±0.02
  
  
≥4.67±0.12
  
  
  
  
203
  
  
0.5 mol/L NaOH
  
  
≥5.17±0.13
  
  
≥4.52±0.02
  
  
Toyopearl super
  
  
0
  
  
  
  
3.49±0.19
  
  
4.70±0.30
  
  
Q650M
  
  
203
  
  
0.5 mol/L NaOH
  
  
3.67±0.25
  
  
≥4.81±0.09
  
1.4 纳米膜过滤 纳米膜过滤技术通过膜孔径大小截留的原理,将病毒和目的蛋白分离。Furuya等[20]在进行FⅧ的纳米膜除病毒验证工作时,发现Planova 35 nm滤器对PRV和BVDV的处理能力较好,能使病毒传染性分别降低>49、>53 log10,但是对EMC和B19仅分别降低15、10 log10;将35 nm滤器替换成20 nm滤器后,不仅EMC和B19分别降低>58、49 log10,同时PPV和HAV也分别降低51、34 log10。Kim等[21]在做FⅨ浓缩物的病毒验证工作时发现,Millipore公司生产的Viresolve NFP 20纳米膜过滤使非脂包膜病毒HAV、PPV和EMCV的传染性分别降低≥612、≥428和≥533 log10。van Holten等[22]也发现Viresolve 180型纳米膜滤器能去除PPV、EMC和HAV分别为33、41和>51 log10。可见该方法通过膜孔径大小对常规病毒灭活方法不能很好处理的细小病毒B19和PPV等具有明显的优势。虽然膜孔径在除病毒时发挥重要作用,但研究表明原料成分、抗原/抗体复合物等对滤器的去除效果存在影响。Yokoyama等[23]发现将含有B19病毒的原料配制成03 mol/L甘氨酸溶液后,再经35 nm纳米膜处理,除B19病毒效果是75 log10,并且对EMC和PPV都能实现同样的效果;向溶液中添加5%白蛋白或免疫球蛋白后,该滤器处理病毒的效果却降低。Kreil等[24]发现在IVIg的制备中,35 nm滤器和15 nm滤器在去除EMC、B19和HAV上效果相当,原因是上述病毒与抗体形成的抗原抗体复合物被35 nm滤器有效截留。也正是上述原因,使得某些小病毒如BPV、Sindbis和SV40由于存在交叉反应抗体的中和作用,不能用于评价纳米膜过滤去除病毒的能力[25]。
2 病毒灭活方面
21 有机溶剂/去污剂(S/D法)处理 S/D法通过破坏脂包膜病毒的脂膜来达到去除病毒的效果,具有不易使蛋白质变性、高回收率和所需设备相对简单等优点;其典型的病毒灭活条件:03% 磷酸三丁酯(TNBP)在24℃用1% TritonX100处理4h,或用1% Tween80处理≥6 h。Horowitz等[26]对S/D法做了验证,发现该方法可使脂包膜病毒VSV、Sindbis、仙台病毒(SeV)、鸭HBV、HIV1、HIV2、HCV、CMV、HSV1、XMuLV和小鼠异嗜性病毒(Murine xenotropic virus)的滴度分别降低≥92、≥88、≥60、≥73、≥110、≥60、≥50、≥60、≥58、≥60和≥40 logID50。Uemura等[27]比较了S/D法和巴氏法对脂包膜病毒Sindbis和VSV的灭活效果,结果巴氏法对病毒的灭活能力分别是58、57 log10,而S/D法则是59、55 log10,可见S/D法是比较严格的灭活脂包膜病毒的方法。虽然S/D法可有效的灭活脂包膜病毒,但是研究表明其对非脂包膜病毒,如牛痘病毒(vaccinia)、HAV和B19的处理能力较差。Roberts 等[28]比较了03% TNBP在24℃用1% Triton X100处理4h,或用1% Tween80处理≥6 h 2种不同的灭活方式对病毒的处理效果,发现二者都能明显降低脂包膜病毒滴度,但是vaccinia病毒却表现出抗性。Lemon等[29]发现S/D法灭活HAV的能力只有122 log10。这就导致了上世纪90年代用S/D法处理的FⅧ制剂出现传播HAV的情况[30]。
22 热处理
221 巴氏消毒法 该方法能灭活所有脂包膜病毒和大部分非脂包膜病毒,在确保血液制品安全性上具有长期良好的记录。CSL公司在制备FⅧ浓缩物的过程中发现,巴氏法可使脂包膜病毒HIV、VSV、Sindbis、Vaccinia和非脂包膜病毒EMC的滴度分别降低≥70—105、≥679、≥648、≥536和≥71 log10[31]。Chandra等[32]也同样发现巴氏法能有效灭活脂包膜病毒,并能实现非脂包膜病毒EMC和Polio1传染能力降低452、>73 log10。虽然巴氏法对病毒灭活效果好,但是研究表明不同蛋白溶液和稳定剂对巴氏法灭活效果存在影响[33]。Hattori等[34]发现巴氏法对IVIg制品中的B19能较快地完全灭活,结合珠蛋白中B19完全灭活较慢,而抗凝血酶Ⅲ制剂中B19病毒只能有限的灭活;在稳定剂保护下,巴氏法对猪肠病毒4(porcine enterovirus4,VIR918)的灭活效果不是很稳定,出现传播该病毒的情况。Chandra等[32]发现以蔗糖和醋酸钾为稳定剂的IVIg制剂用巴氏法处理时,脂包膜病毒经6 h可完全灭活,而非脂包膜病毒EMCV和VIR918经10 h处理后仍存在传染性。虽然存在上述问题,但是巴氏法仍是迄今为止最为严格的病毒处理方法,特别是近60年的临床研究表明,它处理的白蛋白是非常安全的,并将在保证血液制品病毒安全性上继续发挥很好的作用。
222 蒸汽处理法 该方法是在等效温度下,通过在开始加热之前加水蒸气而获得高质量的病毒灭活效果,能灭活脂包膜病毒和包括HAV在内的某些非脂包膜病毒,但是对B19效果较差。Barrett等[35]研究蒸汽处理法对不同种类和纯度的凝血因子浓缩物中HAV、HIV和PRV 3种病毒的灭活效果,发现该方法在规定的时间内能有效灭活脂包膜类病毒及非脂包膜病毒HAV(表3)。Baxter公司对其生产的ARTISS纤维蛋白胶做病毒验证时发现,蒸汽处理法使纤维蛋白原和凝血酶中脂包膜病毒HIV1、BVDV和PRV滴度分别降低>55、>57、>67 log10及>55、>53、>67 log10,非脂包膜病毒HAV的滴度降低>56和>49 log10,但是该法对MMV的灭活能力只达到12和10 log10[36]。Fryer等[37]在对蒸汽处理后的FⅧ进行B19病毒和新型细小病毒PARV4检测时发现,该制品受到这2种病毒的污染,存在传播细小病毒的可能性。此外还有蒸汽法处理的其它凝血因子浓缩物传播HCV和C1蛋白酶抑制剂传播HGV的报道[38]。
表3 不同种类和纯度的凝血因子浓缩物在60℃蒸汽加热10 h

  
制品
  
  
病毒
  
  
灭活滴度(log10)
  
  
最短灭活时间(h)
  
  
中等纯度FⅧ
  
  
HAV
  
  
>33
  
  
8
  
  
  
  
HIV
  
  
>68
  
  
10
  
  
  
  
PRV
  
  
59
  
  
10
  
  
高等纯度FⅧ
  
  
HAV
  
  
39
  
  
10
  
  
  
  
HIV
  
  
67
  
  
10
  
  
  
  
PRV
  
  
56
  
  
10
  
  
中等纯度FⅨ
  
  
HAV
  
  
>57
  
  
6
  
  
  
  
HIV
  
  
>65
  
  
6
  
  
  
  
PRV
  
  
>71
  
  
8
  
  
高等纯度FⅨ
  
  
HAV
  
  
>67
  
  
3
  
  
  
  
HIV
  
  
>79
  
  
8
  
  
  
  
PRV
  
  
>68
  
  
8
  
223 终端干热法 目前在血浆蛋白分离工艺中,该法作为第2步病毒灭活工艺应用到凝血因子类制品的病毒灭活中。Kim等[39]对FⅧ浓缩剂进行100℃水浴 30 min处理,经验证该方法可使脂包膜病毒HIV、BHV、BVDV的滴度分别降低≥515、613和446 log10,对非脂包膜病毒EMCV、HAV处理效果分别为≥587和≥555 log10,但是对PPV的灭活效果只有190 log10。Roberts等[40]同样发现80℃ 8h的干热处理对HIV1和Sindbis病毒的灭活效果明显,分别达到>50和40 log10,但是对HAV、BPV和PPV的处理能力仅分别>28、04和16 log10;随着处理时间延长到72 h,上述3种病毒的滴度分别降低>54、22和44 log10。可见延长处理时间可以得到较好的灭活效果。Roberts等[41]在后期研究中还发现在相同处理条件下,不同的非脂包膜病毒对热表现出不同的抗性:Polio1病毒经8h干热处理即可实现51 log10的灭活,HAV和BPV在冻干和热处理的共同作用下才可实现>54和44 log10的灭活,B19病毒只有将处理时间增加到72 h才能取得明显的灭活效果,而PPV即使经过72 h处理其灭活效果也只是22 log10。针对B19和PPV等耐热性病毒不能简单的延长热处理时间,应通过与其它灭活方法相结合来确保制品的安全性。
23 低pH孵放法 作为IVIg特有的病毒灭活方法,该方法不但能减少制品抗补体活性、避免IgG聚合,同时在保证制品病毒安全性上发挥着重要的作用。Octapharma公司在制备多效价静注人免疫球蛋白OCTAGAM时发现,该制品经低pH孵放法处理后脂包膜病毒HIV1、PRV、SBV和非脂包膜病毒MEV的滴度分别降低≥86、≥77、≥89和≥62 log10,制品安全性得到极大提高[42]。Louie等[43]在研究中也发现,IVIg经pH 425,21℃下处理21 d后,可显著灭活BVDV和HCV。后期研究发现低pH孵放法的病毒处理效果受胃蛋白酶量、pH和温度影响较大。Kempf等[44]研究发现低pH孵放法可有效灭活脂包膜病毒HIV、HSV1、CMV、VSV和SFV,并且在胃蛋白酶的作用下加快了对VSV的灭活效果。Bos等[45]在进行IVIg的低pH孵放法的病毒验证工作时发现,pH 405,37℃条件下处理16 h可降低脂包膜病毒HIV、BVDV、PSR和非脂包膜病毒SV40和EMC滴度分别为≥84、≥40l、≥71、48和14 log10;将pH提高到425后,EMC的处理效果提高到≥41 log10。Baxter公司在制备新一代IVIg时,采用pH 405 30—32℃条件进行病毒灭活验证,HIV1、BVDV、WNV和PRV的滴度分别降低>58、>55、>60和>65 log10,而EMCV和MMV的灭活效果则达到>63和31 log10[46]。Boschetti等[47]发现B19病毒经2 h的低pH处理后滴度降低>5 log10。此外,IVIg制品在存放过程中的低pH环境同样具有灭活病毒的效果。
24 辛酸处理法 随着IVIg临床适应证的增加和需求量的扩大,各血液制品生产厂家不断寻求提高IgG回收率的方法。他们发现辛酸盐不仅起到沉淀蛋白的作用,同时还可在低pH条件下有效的灭活病毒。Johnston等[48]发现辛酸法的灭活病毒效果受温度、辛酸盐浓度和pH的影响。以BVDV作为模式病毒时,在10%白蛋白、16 mmol/L辛酸盐、pH 45,>35℃处理1 h后,BVDV滴度无法检出,而相同条件下,0℃时即使处理12 h也不能达到灭活效果;在l0%白蛋白下考察辛酸浓度对灭活效果的影响,结果表明Sindbis病毒可在辛酸盐浓度>16 mmol/L时瞬间灭活,而在8 mmol/L下需经10 h处理才能使病毒滴度下降 7 log10;在考察pH对灭活效果影响时发现,在10%白蛋白、16 mmol/L辛酸盐和30℃下,pH 43—47的不同范围对BVDV的灭活速率没有差别。为缩短病毒灭活时间、提高IgG收率和避免使用S/D灭活剂,Korneyeva等[49]将辛酸法和IVIg制备中常用的S/D法进行比较,结果表明辛酸在浓度为≥9、≥12和≥9 mmol/L条件下即可分别将组分Ⅱ+Ⅲ中的HIV1、BVDV和PRV病毒有效灭活;与S/D法相比,16 mmol/L辛酸对组分Ⅱ+Ⅲ中的BVDV灭活效果是S/D法的20—60倍,并且当辛酸浓度提高到19mmol/L时,其对溶液IgG的活性没有影响。在组分Ⅳ1中,40 mmol/L辛酸能快速灭活BVDV。上述数据表明,辛酸法可以替代S/D法成为IVIg和白蛋白制备中的病毒灭活工艺。Bayer公司在制备Gamunex IVIg时,将S/D法替换成辛酸法来确保制品安全性,验证表明辛酸法+深层过滤可降低脂包膜病毒BVDV及非脂包膜病毒Reo、HAV和PPV的滴度分别为27、≥35、≥36和40 log10,随后的辛酸法对脂包膜病毒HIV、PRV和BVDV的灭活效果分别≥45、≥46和≥45 log10。通过辛酸处理,制品安全性不但得到提高,并且IgG回收率高于传统的低温乙醇工艺[50,51]。此外,辛酸盐一直作为白蛋白制品的稳定剂,存在用药的安全性,将其作为新一代IVIg制品的病毒灭活方法具有极大的应用价值。
3 结语
     单一的病毒灭活/去除方法虽然能较好的起到处理病毒效果,但是无法灭活和去除所有病毒,如细小病毒B19、VIR918、PARV4、SV40和PrPSc;并且由于现有的检测手段不能完全排除血浆中可能存在的未知病毒,因此国内外相关机构规定在生产血浆蛋白类制品的过程中,为减少病毒传播的可能性,除了应有特定的脂包膜病毒灭活工艺外,还应加入特定的针对非脂包膜病毒的灭活工艺,即2种或2种以上的病毒灭活工艺,如S/D+干热法、低pH孵放法+S/D法和S/D法+纳米膜过滤+低pH孵放法等。与此同时,在考察病毒灭活方法对病毒的处理效果时,也应考虑到生产环节中乙醇沉淀、深层过滤、色谱等病毒去除方法在保证制品安全性上发挥的作用。只有将病毒去除和灭活工艺有机结合,从整体上来考察病毒的处理效果,才能真正意义上确保血液制品的病毒安全性。

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药士
发表于 2016-1-24 00:16:28 | 显示全部楼层
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药士
发表于 2016-1-24 00:16:32 | 显示全部楼层
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药徒
发表于 2016-1-24 07:13:08 | 显示全部楼层
建议弄个pdf.
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药徒
发表于 2017-8-23 15:49:18 | 显示全部楼层
学习一下   
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发表于 2017-10-16 23:53:22 | 显示全部楼层
老师,这个是好东西,可否弄个PDF文件上传呀?谢谢
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发表于 2018-2-1 11:24:35 | 显示全部楼层
《病毒灭活/去除工艺与血液制品病毒安全性》,好像是这篇文章,有谁能下吗
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药徒
发表于 2018-2-8 14:58:27 | 显示全部楼层
总结的特别好
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药徒
发表于 2018-8-8 13:59:43 | 显示全部楼层
非常好的分享。多谢
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药徒
发表于 2018-12-5 16:41:14 | 显示全部楼层
应该是篇文献吧。总结不错。但是还不够全面。
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发表于 2019-2-19 11:29:19 | 显示全部楼层
!!!!!!!!!!!!!!!!!
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发表于 2019-3-12 08:46:33 | 显示全部楼层
努力学习,报效祖国!
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发表于 2020-2-8 11:05:52 | 显示全部楼层
感谢楼主分享
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发表于 2020-2-8 18:04:21 | 显示全部楼层
感谢楼主分享
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药徒
发表于 2020-4-27 22:59:03 来自手机 | 显示全部楼层
您好,您提到的深层过滤,正是我公司主推的深层过滤纸板,欢迎交流
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药生
发表于 2020-4-30 09:59:27 | 显示全部楼层
国药监注[2002]160号

血液制品去除灭活病毒技术方法及验证指导原则.pdf

190.51 KB, 下载次数: 59, 下载积分: 金币 -1

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药徒
发表于 2020-7-28 16:08:02 | 显示全部楼层
乱码有点严重。。。。。看看后面的pdf吧。
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药圣
发表于 2022-8-2 11:58:50 | 显示全部楼层
非常感谢分享
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药徒
发表于 2022-8-25 08:35:17 | 显示全部楼层
谢谢分享!
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发表于 7 天前 | 显示全部楼层
zhudi1999 发表于 2020-4-30 09:59
国药监注[2002]160号

学习了,谢谢分享!
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