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蛋白质弱阴离子层析洗脱阶段问题

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发表于 2017-8-18 14:05:21 | 显示全部楼层 |阅读模式

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蛋白质实验过程中,弱阳离子柱层析时,一直都是以40%的梯度洗脱收集目的蛋白的,但是一次洗脱过程中,蛋白质在此梯度没有洗脱下来,最后用100%高盐才洗脱下来,请问大家产生这种现象的原因可以从哪些方面来分析?(以前的目的蛋白都是40%梯度下洗脱收集的,就出现过一次这样的情况,这一批的菌种与以前不一样,换了新的)
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发表于 2017-8-18 16:42:15 | 显示全部楼层
遇到这种问题我们首先是核对电导,检查溶液是否正确,然后检查设备,是否能达到40%的梯度
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药徒
发表于 2017-8-18 23:52:50 | 显示全部楼层
换新菌种后,每批都会出现这种情况吗?如果是,可能是菌种表达蛋白成分或者蛋白在微生物内的修饰发生了变化。
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药师
发表于 2017-8-19 07:53:26 | 显示全部楼层
这要考虑目的物一致性了
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 楼主| 发表于 2017-8-19 14:52:37 | 显示全部楼层
xqliu 发表于 2017-8-19 07:53
这要考虑目的物一致性了

谢谢指导。但是我不是太明白,能说明白点么?

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也就是不要改变原辅料和工艺,才会有您要求的目的物  详情 回复 发表于 2017-8-19 18:32
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 楼主| 发表于 2017-8-19 14:53:42 | 显示全部楼层
凯恩血蹄 发表于 2017-8-18 23:52
换新菌种后,每批都会出现这种情况吗?如果是,可能是菌种表达蛋白成分或者蛋白在微生物内的修饰发生了变化 ...

谢谢指导。这批菌种也是第一次做的,只是改变了几个氨基酸
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 楼主| 发表于 2017-8-19 14:54:41 | 显示全部楼层
matingtao 发表于 2017-8-18 16:42
遇到这种问题我们首先是核对电导,检查溶液是否正确,然后检查设备,是否能达到40%的梯度

这些条件我们都检查过了,都是正常的,设备啥的都是好的。
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药师
发表于 2017-8-19 18:32:10 | 显示全部楼层
忆暑 发表于 2017-8-19 14:52
谢谢指导。但是我不是太明白,能说明白点么?

也就是不要改变原辅料和工艺,才会有您要求的目的物
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药徒
发表于 2017-8-19 22:32:04 | 显示全部楼层
忆暑 发表于 2017-8-19 14:53
谢谢指导。这批菌种也是第一次做的,只是改变了几个氨基酸

所以,因为这几个氨基酸的改变,就改变了目标蛋白的特性了,至少是洗脱时候的盐浓度变了。这个改变,是否会影响产品的CQA,你们研究过吧?还有工艺参数,你们当初是否给了足够宽的范围呀?

感觉你们有得要忙了
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药徒
发表于 2017-8-22 23:23:59 | 显示全部楼层
你这是离子交换层析么?其它的工艺步骤各个检测结果都正常就这一个不正常么?
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 楼主| 发表于 2017-8-23 16:42:55 | 显示全部楼层
木鱼 发表于 2017-8-22 23:23
你这是离子交换层析么?其它的工艺步骤各个检测结果都正常就这一个不正常么?

是的,前面的步骤都正常,就最后的弱阳离子柱出现这个情况,后来测了一下等电点,以前的和现在这个PH相差1.68。
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 楼主| 发表于 2017-8-23 16:43:56 | 显示全部楼层
cnosema 发表于 2017-8-19 22:32
所以,因为这几个氨基酸的改变,就改变了目标蛋白的特性了,至少是洗脱时候的盐浓度变了。这个改变,是否 ...

谢谢!后来测了一下等电点,原来的和现在的相差了1.68

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呃,从工艺一致性角度来说,你们要忙了  详情 回复 发表于 2017-8-23 21:59
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药徒
发表于 2017-8-23 21:59:51 | 显示全部楼层
忆暑 发表于 2017-8-23 16:43
谢谢!后来测了一下等电点,原来的和现在的相差了1.68

呃,从工艺一致性角度来说,你们要忙了
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药徒
发表于 2017-8-24 08:04:38 | 显示全部楼层
等电点变了,说明产品变了,体系Ph值是否有变化呢
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药徒
发表于 2017-9-8 13:37:32 | 显示全部楼层
cnosema 发表于 2017-8-23 21:59
呃,从工艺一致性角度来说,你们要忙了

应该只是前期研发过程,所以还好吧
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