蒲公英 - 制药技术的传播者 GMP理论的实践者

标题: 预制培养基适用性 [打印本页]

作者: 绯浠 时间: 2025-8-6 11:28
标题: 预制培养基适用性
我想请教一下各位老师预制的TSA培养基都怎么做适用性，用涂布法的话，55mm的滴多少合适，0.1ml吗？这0.1ml的菌浓度是100cfu/ml吗？90mm的能直接加1ml100cfu的菌液涂布，会不会太多

作者: 17393109025 时间: 2025-8-6 12:21
我也好奇，还有新的国标里，培养基适用性的培养温度好像不一样

作者: 依然星期三 时间: 2025-8-6 12:56
涂布法一般是0.1ml，倾注法一般1ml，

作者: 世间始终你好 时间: 2025-8-6 12:59
以下回复来自chatgpt,内容仅供参考：

你提到的是对TSA培养基的适用性验证（即恢复率实验），这在药典和无菌检查/微生物限度相关实验中非常重要。下面我从方法、接种量、菌液浓度几个关键点来系统回答你的问题：

一、适用性验证的基本思路适用性验证的目的是验证你所使用的培养基是否适合检测目标微生物，即是否具有足够的恢复率（≥70%）。典型步骤：

使用标准菌株（如枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等）；
用一定浓度（如100 CFU/mL）的菌悬液；
滴加一定体积（如0.1mL、1mL）至培养基表面或与待测样品处理后一道进行；
涂布均匀后培养；
统计菌落数，计算恢复率。

二、不同培养皿直径的建议接种量培养皿直径推荐接种体积（涂布法）合理菌落数范围（CFU）备注
55 mm（小皿）0.1 mL10-100 CFU体积太大会造成水淹现象
90 mm（标准皿）0.1~1.0 mL10-100 CFU常用0.1 mL 或 1.0 mL，1mL不会太多，但菌浓度要合适你的理解是对的：

55mm皿建议滴加 0.1 mL，不能太多，否则液体铺不开，影响计数。
菌液浓度若是 100 CFU/mL，那0.1 mL ≈10 CFU，是比较理想的。
90mm皿滴加 1 mL的100 CFU/mL菌液 ≈100 CFU，也合理，不会“太多”，但必须均匀涂布，避免菌群重叠。

三、药典的浓度建议（以中国药典、USP为参考）

一般建议接种菌液中的菌数为10~100 CFU；
所以你可以配制 100 CFU/mL的菌悬液；
然后根据培养皿大小，分别滴加 0.1 mL（得10 CFU）或 1 mL（得100 CFU）。

四、恢复率计算举例（适用性判断）假设你原始菌液接种在平板上，长出了95个菌落；再用同样方法加到含有抗生素/抑菌样品后的平板，长出了65个菌落，则：
恢复率=6595×100%=68.4%（不合格）恢复率 = \frac{65}{95} \times 100\% = 68.4\% \quad （不合格）药典要求：恢复率 ≥ 70%，才算培养基适用或抗菌样品干扰被排除。

总结你的问题问题答案
55mm TSA平皿涂布菌液滴多少合适？推荐 0.1 mL
这0.1 mL菌液浓度为多少？推荐用 100 CFU/mL，即接种约10 CFU
90mm TSA皿能直接加1 mL、100 CFU/mL菌液吗？可以，总菌数为100 CFU，不会太多，但需均匀涂布

作者: 逸清草堂 时间: 2025-8-6 14:00

世间始终你好发表于 2025-8-6 12:59
以下回复来自chatgpt,内容仅供参考：

这个回答不太好

作者: 世间始终你好 时间: 2025-8-6 14:03

逸清草堂发表于 2025-8-6 14:00
这个回答不太好

不知道怎么回答才能让你满意

作者: 绯浠 时间: 2025-8-6 14:07

世间始终你好发表于 2025-08-06 12:59
以下回复来自chatgpt,内容仅供参考：

你提到的是对TSA培养基的适用性验证（即恢复率实验），这在药典和无菌检查/微生物限度相关实验中非常重要。下面我从方法、接种量、菌液浓度几个关键点来系统回答你的问题：
一、适用性验证的基本思路适用性验证的目的是验证你所使用的培养基是否适合检测目标微生物，即是否具有足够的恢复率（≥70%）。典型步骤：
使用标准菌株（如枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等）；
用一定浓度（如100 CFU/mL）的菌悬液；
滴加一定体积（如0.1mL、1mL）至培养基表面或与待测样品处理后一道进行；
涂布均匀后培养；
统计菌落数，计算恢复率。

二、不同培养皿直径的建议接种量培养皿直径推荐接种体积（涂布法）合理菌落数范围（CFU）备注
55 mm（小皿）0.1 mL10-100 CFU体积太大会造成水淹现象
90 mm（标准皿）0.1~1.0 mL10-100 CFU常用0.1 mL 或 1.0 mL，1mL不会太多，但菌浓度要合适你的理解是对的：
55mm皿建议滴加 0.1 mL，不能太多，否则液体铺不开，影响计数。
菌液浓度若是 100 CFU/mL，那0.1 mL ≈10 CFU，是比较理想的。
90mm皿滴加 1 mL的100 CFU/mL菌液 ≈100 CFU，也合理，不会“太多”，但必须均匀涂布，避免菌群重叠。

三、药典的浓度建议（以中国药典、USP为参考）一般建议接种菌液中的菌数为10~100 CFU；
所以你可以配制 100 CFU/mL的菌悬液；
然后根据培养皿大小，分别滴加 0.1 mL（得10 CFU）或 1 mL（得100 CFU）。

四、恢复率计算举例（适用性判断）假设你原始菌液接种在平板上，长出了95个菌落；再用同样方法加到含有抗生素/抑菌样品后的平板，长出了65个菌落，则：
恢复率=6595×100%=68.4%（不合格）恢复率 = \frac{65}{95} \times 100\% = 68.4\% \quad （不合格）药典要求：恢复率 ≥ 70%，才算培养基适用或抗菌样品干扰被排除。
总结你的问题问题答案
55mm TSA平皿涂布菌液滴多少合适？推荐 0.1 mL
这0.1 mL菌液浓度为多少？推荐用 100 CFU/mL，即接种约10 CFU
90mm TSA皿能直接加1 mL、100 CFU/mL菌液吗？可以，总菌数为100 CFU，不会太多，但需均匀涂布

好的，谢谢老师，我还有一个问题，对照培养基制成平皿后，也是同样涂布0.1ml吗

作者: 世间始终你好 时间: 2025-8-6 14:08

绯浠发表于 2025-8-6 14:07
好的，谢谢老师，我还有一个问题，对照培养基制成平皿后，也是同样涂布0.1ml吗

是的，对照培养基制成的平皿在做适用性验证时，同样可以涂布 0.1 mL 的菌液，以与测试用培养基平皿形成对比，以下是具体说明：

一、对照培养基的作用对照培养基是指没有添加待检样品的培养基，用于作为菌落数的对照参考，计算恢复率时使用。

恢复率（%） = 测试培养基平皿的菌落数 ÷ 对照培养基平皿的菌落数 × 100%

二、操作方法一致性无论是测试培养基平皿还是对照培养基平皿：
步骤说明
接种体积通常都为 0.1 mL，尤其是55mm皿
菌液浓度100 CFU/mL 最常用，这样每皿接种约10 CFU，便于计数
涂布方式使用无菌涂布棒、L形玻棒等均匀涂开
培养条件同一温度、时间培养（如3035°C，培养35天）

三、注意事项

对照皿和测试皿的接种操作、培养条件必须完全一致；
一般每种培养基和每种菌株要做 至少3个平皿重复，取平均值；
若对照平皿本身菌落数量偏少（<10 CFU），统计误差大，建议调浓度或用更多重复组。

四、补充示意（以55mm皿为例）项目操作
菌液浓度100 CFU/mL
滴加体积0.1 mL
接种菌数约10 CFU
涂布皿种类对照TSA平皿 × 3、测试TSA平皿 × 3
培养条件3035°C，35天（按菌种要求）
判断标准恢复率 ≥ 70% 合格

如你希望对接种量做更精确控制，也可使用 螺旋接种仪、稀释涂布法、滤膜法 等替代。

作者: 绯浠 时间: 2025-8-6 14:08

依然星期三发表于 2025-08-06 12:56
涂布法一般是0.1ml，倾注法一般1ml，

好的，谢谢老师

作者: 逸清草堂 时间: 2025-8-6 14:14

世间始终你好发表于 2025-8-6 14:03
不知道怎么回答才能让你满意

错的太明显的就不是很好，会误导人，是这个意思

作者: 世间始终你好 时间: 2025-8-6 14:15

逸清草堂发表于 2025-8-6 14:14
错的太明显的就不是很好，会误导人，是这个意思

求打假，我也给chatgpt上一课

作者: 逸清草堂 时间: 2025-8-6 14:21

世间始终你好发表于 2025-8-6 14:15
求打假，我也给chatgpt上一课

自个翻药典吧

作者: 小雨滴答滴 时间: 2025-8-6 14:25

逸清草堂发表于 2025-08-06 14:00
这个回答不太好

想请教一下你对这个实验的看法已经看到好几条帖子下面有您的回复了均是隐藏锋芒的评论想必是教授级别的大人物呢可以详谈一下吗

作者: 逸清草堂 时间: 2025-8-6 14:28

小雨滴答滴发表于 2025-8-6 14:25
想请教一下你对这个实验的看法已经看到好几条帖子下面有您的回复了均是隐藏锋芒的评论想必是教授级别 ...

少来，我就是键盘侠杠精

作者: 绯浠 时间: 2025-8-6 14:41

世间始终你好发表于 2025-08-06 14:08
是的，对照培养基制成的平皿在做适用性验证时，同样可以涂布 0.1 mL 的菌液，以与测试用培养基平皿形成对比，以下是具体说明：
一、对照培养基的作用对照培养基是指没有添加待检样品的培养基，用于作为菌落数的对照参考，计算恢复率时使用。
恢复率（%） = 测试培养基平皿的菌落数 ÷ 对照培养基平皿的菌落数 × 100%
二、操作方法一致性无论是测试培养基平皿还是对照培养基平皿：
步骤说明
接种体积通常都为 0.1 mL，尤其是55mm皿
菌液浓度100 CFU/mL 最常用，这样每皿接种约10 CFU，便于计数
涂布方式使用无菌涂布棒、L形玻棒等均匀涂开
培养条件同一温度、时间培养（如3035°C，培养35天）三、注意事项对照皿和测试皿的接种操作、培养条件必须完全一致；
一般每种培养基和每种菌株要做至少3个平皿重复，取平均值；
若对照平皿本身菌落数量偏少（<10 CFU），统计误差大，建议调浓度或用更多重复组。

四、补充示意（以55mm皿为例）项目操作
菌液浓度100 CFU/mL
滴加体积0.1 mL
接种菌数约10 CFU
涂布皿种类对照TSA平皿 × 3、测试TSA平皿 × 3
培养条件3035°C，35天（按菌种要求）
判断标准恢复率 ≥ 70% 合格如你希望对接种量做更精确控制，也可使用螺旋接种仪、稀释涂布法、滤膜法等替代。

好的，非常感谢

作者: 门门 时间: 2025-8-6 17:53

逸清草堂发表于 2025-8-6 14:28
少来，我就是键盘侠杠精

来一起扯皮嘛，别总一句话把天聊死呀！

作者: Mr●小肚子♂ 时间: 2025-8-7 07:55
55和90的平皿实际操作上涂0.1ml是比较合适的（个人感觉55的可以再少一些，比如0.05ml），GPT是加入不大于100CFU的菌量，所以你的菌浓应该是不大于1000CFU/ml
另外回收率药典的要求是0.5-2，0.7固然更好，但是你不一定能成功，加入10CFU的菌量涂布也很容易误差超出范围，AI都是搜集网上资源搞出来的，但是网上的资源对错都有。谨慎甄别

作者: 不见猫骨头 时间: 2025-8-7 08:28
90mm的接种0.1ml不大于100cfu的菌悬液，太多涂不干，湿哒哒的；55mm的接种0.05ml不大于100cfu的菌悬液

作者: 逸清草堂 时间: 2025-8-7 10:02

门门发表于 2025-8-6 17:53
来一起扯皮嘛，别总一句话把天聊死呀！

他要找教授级别的，我没有这个水平

作者: 小雨滴答滴 时间: 2025-8-7 11:13

逸清草堂发表于 2025-08-07 10:02
他要找教授级别的，我没有这个水平

那只能说您很能装了把这样一个讨论问题的帖子搞得乌烟瘴气自己又不说问题在哪里装什么啊是不是教授不知道听不懂人话你是第一名装货

作者: 逸清草堂 时间: 2025-8-7 11:25

小雨滴答滴发表于 2025-8-7 11:13
那只能说您很能装了把这样一个讨论问题的帖子搞得乌烟瘴气自己又不说问题在哪里装什么啊是不是教授不 ...

急眼了
我装了，咋滴，咬我啊

作者: 门门 时间: 2025-8-7 12:04

逸清草堂发表于 2025-8-7 11:25
急眼了
我装了，咋滴，咬我啊

我咬你，汪，汪汪......汪汪汪耶

作者: 为了微生物 时间: 2025-8-7 12:18

小雨滴答滴发表于 2025-8-6 14:25
想请教一下你对这个实验的看法已经看到好几条帖子下面有您的回复了均是隐藏锋芒的评论想必是教授级别 ...

培养基适用性这么简单，还要什么看法，微生物基础实验

作者: 为了微生物 时间: 2025-8-7 12:20

绯浠发表于 2025-8-6 14:41
好的，非常感谢

55mm是凸出的，还涂布棒。信AI得永生

作者: 为了微生物 时间: 2025-8-7 12:25
本帖最后由为了微生物于 2025-8-7 12:28 编辑

绯浠发表于 2025-8-6 14:41
好的，非常感谢

由于我已屏蔽此人，所以只能看到引用的内容，该内容有以下错误：
1.培养时间错误，接触碟TSA适用性应＜最短培养时间，即≤3天，接触碟培养基采用涂布法，培养时间更短，以免长成一片
2.平板法平行测试2个平皿即可
3.回收率为2倍因子，即50-200%。

以上符合中国药典1105，别被无良商家使用AI回答误导

作者: 为了微生物 时间: 2025-8-7 12:26

小雨滴答滴发表于 2025-8-7 11:13
那只能说您很能装了把这样一个讨论问题的帖子搞得乌烟瘴气自己又不说问题在哪里装什么啊是不是教授不 ...

由于我已屏蔽此人，所以只能看到引用的内容，该内容有以下错误：
1.培养时间错误，接触碟TSA适用性应＜最短培养时间，即≤3天
2.平板法平行测试2个平皿即可
3.回收率为2倍因子，即50-200%。

问题在这

作者: 逸清草堂 时间: 2025-8-7 14:00

为了微生物发表于 2025-8-7 12:18
培养基适用性这么简单，还要什么看法，微生物基础实验

有的人是你跟他说去翻药典，他都懒得去翻一下，只想着别人嚼碎了再吐出来给喂进去

作者: 逸清草堂 时间: 2025-8-7 14:01

门门发表于 2025-8-7 12:04
我咬你，汪，汪汪......汪汪汪耶

门老师，求放过

作者: 小雨滴答滴 时间: 2025-8-7 14:58

为了微生物发表于 2025-08-07 12:26
由于我已屏蔽此人，所以只能看到引用的内容，该内容有以下错误：
1.培养时间错误，接触碟TSA适用性应＜最短培养时间，即≤3天
2.平板法平行测试2个平皿即可
3.回收率为2倍因子，即50-200%。

问题在这

看不惯她好几条帖子都有不给人解决问题杠精第一名在那里冷嘲热讽的真难评

作者: 小雨滴答滴 时间: 2025-8-7 14:59

为了微生物发表于 2025-08-07 12:26
由于我已屏蔽此人，所以只能看到引用的内容，该内容有以下错误：
1.培养时间错误，接触碟TSA适用性应＜最短培养时间，即≤3天
2.平板法平行测试2个平皿即可
3.回收率为2倍因子，即50-200%。

问题在这

我不仅仅在这一条帖子下面看到她了

作者: 小雨滴答滴 时间: 2025-8-7 15:00

逸清草堂发表于 2025-08-07 11:25
急眼了
我装了，咋滴，咬我啊

不是所有人都跟你一样

天天在评论区挑错看到好几次了杠精是吧我还喷子呢搞笑

作者: 小雨滴答滴 时间: 2025-8-7 15:01

为了微生物发表于 2025-08-07 12:18
培养基适用性这么简单，还要什么看法，微生物基础实验

那她讲讲呗这帖子又不是用来冷嘲热讽的笑死人家好心告诉帖主她叫上了我看到她好几次了还都是在新人贴下面

作者: 逸清草堂 时间: 2025-8-7 15:04

小雨滴答滴发表于 2025-8-7 15:00
不是所有人都跟你一样天天在评论区挑错看到好几次了杠精是吧我还喷子呢搞笑

我第一句说这个回答不太好，已经很委婉了，但凡你做过这个事情，都不会用这个AI错漏百出的答案来回答人家，我说让他自个翻药典，咋滴了
也不怪你，大概你也没看出来他的答案有什么错误

作者: 绯浠 时间: 2025-8-8 09:11

为了微生物发表于 2025-08-07 12:25
本帖最后由为了微生物于 2025-8-7 12:28 编辑

由于我已屏蔽此人，所以只能看到引用的内容，该内容有以下错误：
1.培养时间错误，接触碟TSA适用性应＜最短培养时间，即≤3天，接触碟培养基采用涂布法，培养时间更短，以免长成一片
2.平板法平行测试2个平皿即可
3.回收率为2倍因子，即50-200%。

以上符合中国药典1105，别被无良商家使用AI回答误导

老师，我想问一下黑曲跟白念也是小于等于3天吗，还是按药典小于等于5天，我看到有人黑曲白念只培养72h，但是不知道依据哪里

作者: 为了微生物 时间: 2025-8-11 08:21

绯浠发表于 2025-8-8 09:11
老师，我想问一下黑曲跟白念也是小于等于3天吗，还是按药典小于等于5天，我看到有人黑曲白念只培养72h， ...

药典TSA培养基适用性，白念和黑曲霉确实≤5天，涂布法没必要培养5天，尤其接触碟面积本来就小。72h也是满足≤5天

作者: 为了微生物 时间: 2025-8-11 09:37

绯浠发表于 2025-8-8 09:11
老师，我想问一下黑曲跟白念也是小于等于3天吗，还是按药典小于等于5天，我看到有人黑曲白念只培养72h， ...

等你培养5天，黑曲霉估计长满整个平板了

作者: 绯浠 时间: 2025-8-11 14:46

为了微生物发表于 2025-08-11 09:37
等你培养5天，黑曲霉估计长满整个平板了

好的，谢谢老师

作者: cjlife 时间: 昨天 09:06

逸清草堂发表于 2025-8-7 11:25
急眼了
我装了，咋滴，咬我啊

他们这些等级高的，在哪混的经验啊？搁这误人子弟

作者: 逸清草堂 时间: 昨天 09:32

cjlife 发表于 2025-8-21 09:06
他们这些等级高的，在哪混的经验啊？搁这误人子弟

经验主要就是靠误人子弟得来的

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