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标题: 支原体“无处遁形”，荧光探针法qPCR检测试剂盒全新就位 [打印本页]
作者: Freyaun0 时间: 4 天前
标题: 支原体“无处遁形”，荧光探针法qPCR检测试剂盒全新就位
本帖最后由 Freyaun0 于 2025-9-8 15:45 编辑
一、背景及应用介绍
支原体是一类没有细胞壁、形态多变、尺寸极小的简单原核生物。它们既是重要的人类和动物病原体，也是细胞培养中棘手且危害巨大的污染物。有报道显示Giemsa染色血细胞感染支原体，SEM透射电镜，以及激光共聚焦Confocol染色观察细胞感染支原体[1,2,3]。见图1，2。
图1
图2
支原体对细胞治疗产品的具体危害：
1. 对细胞本身的影响
（1）改变细胞生物学功能：与细胞竞争营养，分泌代谢废物，抑制细胞增殖和代谢，甚至导致细胞死亡。
（2）干扰细胞基因表达：改变宿主细胞的DNA、RNA和蛋白质合成，可能导致治疗性细胞（如CAR-T细胞、干细胞）关键功能丧失（如杀伤肿瘤能力、分化潜能）。
（3）引起遗传不稳定性：可能导致宿主细胞染色体畸变，带来不可预见的风险。
2. 对患者的风险
（1）引发全身性感染：细胞产品被直接回输至患者体内，大量支原体可导致败血症或菌血症，对免疫系统脆弱的患者是致命威胁。
（2）加剧细胞因子释放综合征（CRS）：支原体成分可能触发或加剧CRS，导致难以控制的炎症风暴。引起过敏反应等其他免疫副作用。
（3）导致治疗失败：受污染的细胞产品可能完全失效，患者不仅无法获益，更可能错过最佳治疗时机。
3. 对生产过程的挑战
（1）交叉污染：支原体极易在培养箱、操作台、培养基等之间传播，污染整个生产线。
（2）检测耗时：法规要求的培养法检测需28天，与细胞产品“现做现用”的紧迫时间窗口存在巨大矛盾。
监管与质量控制要求
鉴于其极端危害，全球监管机构（如FDA、EMA、NMPA）对支原体检测有强制性和放行必检的要求。传统方法有培养法和指示细胞培养法，但是NAT法灵敏度，检测效率更高，是发展趋势[1-9]。
检测标准：
（1）培养法：黄金标准，但耗时长达28天。
（2）指示细胞培养法（DNA荧光染色法）：常用替代方法，更快（约1周），灵敏度高，但操作繁琐。
（3）核酸扩增技术（NAT）：最快（1天内），灵敏度极高，已成为各国药典认可的重要方法（如qPCR法）。
在细胞治疗产品的研发与生产过程中，病原体污染可能导致严重的临床风险，而传统检测方法（如培养法）存在周期长、灵敏度不足等局限性。荧光定量PCR凭借其高灵敏度、快速和特异性强的优势，成为细胞治疗质量控制的关键技术。本试剂盒针对细胞治疗产品的特色需求开发，可精准检测多种病原体污染物，确保从细胞库建立到终产品放行的全流程安全性，为细胞治疗产品的合规化生产提供可靠保障。
