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[其他] 白花延龄草提取物的药物活性测试研究

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药徒
发表于 2019-2-11 16:48:58 | 显示全部楼层 |阅读模式

为了对药物进行效力检测和药效学评价从而控制药物质量,需要进行药物活性测试研究,免疫活性试验是一种常见的用于药物活性测试的方法。药物活性测试可通过体外的细胞学实验或体内的动物实验来完成。白花延龄草为一种药用植物具有清热解毒和镇静安神的功效,为了研究白花延龄草的采用不同工艺提取的提取物活性,可进行提取物的免疫活性研究。

近代药理学研究表明,延龄草具有降压、镇痛和抗肿瘤等作用,延龄草属植物中的次生代谢产物以皂苷为主,包括甾体皂苷、黄酮苷、倍半萜苷、苯丙素苷等类型的化合物。研究者通过提取、分离纯化得到了白花延龄草的主要甾体皂苷类化学成分,并对其进行结构鉴定;通过正交试验对提取得到的甾体皂苷的提取工艺进行优化研究;同时还进一步对其提取物进行免疫活性研究[1]。

药物活性测试可通过体外的细胞学实验或者体内的动物实验来完成。上海美迪西提供新药研发服务,其生物部在体外生物学领域有丰富广泛的经验,通过酶水平测定、细胞水平测定、细胞生物学、生物化学、体外同位素测定、稳定细胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技术等,提供一套完整的生物学服务。

免疫系统是机体抵制外来病原体入侵、维持整体功能平衡的一个重要系统,通过免疫应答和分泌免疫分子来发挥自身功能。免疫应答包括固有性免疫应答和适应性免疫应答。固有免疫应答也称为非特异性免疫,是生物体在长期种系进化过程中形成的一系列防御机制。固有免疫在个体出生时就具备,产生非特异性抗感染免疫作用,主要包括吞噬细胞、自然杀伤细胞(NK)和树突状细胞(DC)等。

适应性免疫应答是指体内抗原特异性T/B淋巴细胞接受抗原刺激后,自身活化、增殖、分化为效应细胞,产生一系列生物学效应的全过程。据参与免疫应答细胞种类及其机制的不同,可将适应性免疫应答分为T淋巴细胞介导的细胞免疫应答和B/T淋巴细胞介导的体液免疫应答2种类型。

1、白花延龄草甾体皂苷类化学成分研究

研究者采用LC-MS/MS技术对白花延龄草提取物的正丁醇萃取相进行了定性分析,共从中鉴定出7个甾体皂苷:偏诺皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-吡喃鼠李糖基-O-(α-L-吡喃鼠李糖基)-β-D-葡萄糖苷或其异构体(1)、原薯蓣皂苷元-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3-O-β-马铃薯三糖苷(2)、24-羟基偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷(3)、偏诺皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、重楼皂苷Ⅶ(5)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(6)、重楼皂苷Ⅵ(7)。   

采用色谱技术对白花延龄草提取物的正丁醇萃取相进行了分离纯化及结构鉴定,得到了4个甾体皂苷,分别为:化合物1:24-羟基偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷、化合物2:重楼皂苷Ⅶ、化合物3:偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-葡萄糖苷、化合物4:重楼皂苷Ⅵ。通过HPLC法对白花延龄草提取所得的4个甾体皂苷进行了定量分析,并且对含量测定的方法学进行了考察。测定结果显示,化合物1、化合物2、化合物3、化合物4 4个皂苷的含量的平均值分别为0.463mg/g、0.922mg/g、3.135mg/g、3.899mg/g。

2、正交试验优化所得甾体皂苷的提取工艺

采用HPLC法测定,以料液比、提取时间、提取温度3个因素进行正交试验来优化4个甾体皂苷的提取工艺。由实验的方差分析结果可得4个甾体皂苷的最佳提取工艺,其对应的料液比、提取时间、提取温度分别为:化合物1:1:8、4h、80℃;化合物2:1:9、4h、90℃;化合物3:1:10、4h、90℃;化合物4:1:12、4h、90℃。

3、白花延龄草提取物的免疫活性研究

白花延龄草的8个提取物组分分别为:组分1:乙醇粗提取物;组分2:正丁醇萃取相;组分3:乙酸乙酯萃取相;组分4:水相;组分5:化合物1;组分6:化合物2;组分7:化合物3;组分8:化合物4。提取物组分对小鼠腹腔巨噬细胞的影响研究表明:8个提取物中以正丁醇萃取相活性最强;其次是组分8;组分5、组分6、组分7次之,3个组分活性差异不显著。正丁醇相中含有大量皂苷类成分,由此推测,白花延龄草皂苷类成分具有辅助增强免疫调节的活性,且具有协同作用。提取物组分对小鼠脾淋巴细胞的影响研究表明:各提取物组分中以正丁醇萃取相的活性最强,为75.2%;其次为组分6、组分8和组分5,分别为61.1%、60.8%和56.8%;乙酸乙酯萃取相活性最弱,为3.6%。

MTT法检测提取物组分的细胞毒性研究表明:白花延龄草根茎的8个提取物组分,除乙酸乙酯组分具有较弱细胞毒性外,其它7个组分均不具有细胞毒性。由此证明,白花延龄草在辅助提高机体免疫功能方面具有相对的安全性和稳定性。

药物活性测试是药物质量控制的重要一环,通过对药物进行活性测试,可以评价不同批次产品药物的作用效力,为获得质量稳定、治疗效果肯定的药物提供了帮助。

[1]白花延龄草甾体皂苷类成分分析及其提取物免疫活性研究[J]

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药徒
发表于 2019-2-11 17:13:27 | 显示全部楼层

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medicilon  是我发的。  详情 回复 发表于 2019-2-12 09:20
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药徒
 楼主| 发表于 2019-2-12 09:20:14 | 显示全部楼层
寂寞雨中行 发表于 2019-2-11 17:13
找到文章来源了:http://blog.sina.com.cn/s/blog_b5aac5390102y5ld.html

是我发的。
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