蒲公英 - 制药技术的传播者 GMP理论的实践者

 找回密码
 立即注册

QQ登录

只需一步,快速开始

使用微信帐号登录

使用微信帐号登录

查看: 161|回复: 3
收起左侧

[其他] PTPN6重组蛋白表达纯化及PTPN6与食管癌的关系研究

[复制链接]
药徒
发表于 7 天前 | 显示全部楼层 |阅读模式
非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶6(PTPN6)蛋白被认为是血液和实体恶性肿瘤中的候选肿瘤抑制因子,在一些血液系统恶性肿瘤以及肝癌、乳腺导管癌、肺癌和食管癌在内的实体瘤中均发现PTPN6与肿瘤的发生发展呈负相关趋势。进行PTPN6重组蛋白表达与纯化研究,为进一步探讨其功能提供了研究基础。食道鳞状细胞癌是发生在食管鳞状上皮的一种恶性肿瘤,也可称为食道癌,是食管癌的主要病理类型,占病理诊断的90%左右。据国家癌症中心最新统计数据显示,食管癌在恶性肿瘤死亡原因中排名第4,我国是世界上食管癌高发的地区之一。有研究者探讨了PTPN6蛋白表达与食管癌的关系,有助于阐明食管癌发生和发展的分子机制。

异常的蛋白质磷酸化是癌细胞的重要标志之一,并且在许多情况下为肿瘤的发生发展提供了有利条件。蛋白磷酸酶是细胞信号传导的关键调节因子,包括蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶和蛋白酪氨酸磷酸酶等。PTPN6是胞浆蛋白酪氨酸磷酸酶家族中的一员,该家族由17名成员组成,它们含有高度保守的催化结构域和可变的调控结构域,可指导亚细胞靶向或直接调节磷酸酶活性。研究发现PTPN6蛋白表达缺失可能导致细胞的恶性转化和增加肿瘤的侵袭性,在肿瘤的发生发展过程中发挥肿瘤抑制基因的作用。

为了研究PTPN6蛋白表达与癌症的关系,有研究者进行了PTPN6重组蛋白表达与纯化研究。重组蛋白表达与纯化技术在现代生物学发展中起着非常重要的作用,美迪西提供蛋白表达服务,其拥有多种蛋白表达系统,包括原核蛋白表达系统、酵母蛋白表达系统、昆虫细胞蛋白表达系统(杆状病毒)和哺乳动物细胞蛋白表达系统,具备多种融合技术,可以为客户在蛋白表达与纯化方面提供多种选择。


研究者构建了真核表达载体pENTER-PTPN6,在HEK293T细胞中表达并纯化,并初步探讨PTPN6对肺癌细胞系A549细胞增殖能力的影响[1]。方法是构建真核表达载体pENTER-PTPN6,利用jetPRIME分别转染HEK293T和A549细胞,用western印迹分析法检测PTPN6在细胞中的表达情况,并通过磁珠纯化PTPN6蛋白,最后利用CCK-8法检测PTPN6对A549的增殖影响并绘制细胞生长曲线。

Western Blot结果显示转染细胞内有PTPN6的高表达,磁珠纯化得到高纯度的目标蛋白,而且转染后的肺癌细胞A549增殖能力较对照组显著下降。结果成功构建了真核表达质粒pENTER-PTPN6,并在真核表达系统中表达和纯化。重组PTPN6具有抑制A549细胞的增殖的作用,为进一步探讨PTPN6基因的功能及寻找治疗肺癌新方向奠定了基础。

2、PTPN6表达与食管癌的关系

有研究者探讨了PTPN6基因在不同食管鳞状细胞癌细胞株中的表达及其对Eca109、Yes-2细胞恶性生物学行为的影响[2]。方法是应用qPCR法检测不同食管鳞癌细胞株(TE1、Eca109、Kyse150、Kyse170、Yes-2)中PTPN6m RNA的表达水平,以pcDNA3.1-PTPN6质粒分别瞬时转染食管鳞癌细胞株Eca109和Yes-2。应用qPCR和Wb法检测PTPN6 mRNA和蛋白的表达水平,并应用MTS、克隆形成实验、划痕实验和Transwell法检测过表达PTPN6基因对食管鳞癌细胞恶性生物学行为的影响。

结果发现PTPN6基因在5种食管鳞癌细胞侏中表达均明显下调(均P<0.05)。与转染空载体的对照组相比,经pcDNA3.1-PTPN6转染后,Eca109和Yes-2细胞均高水平表达PTPN6(P<0.05或P<0.01);过表达PTPN6基因后,Eca109和Yes-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显被抑制(均P<0.05)。因此PTPN6基因高表达能抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其可能是影响食管鳞癌细胞生物学特性的一个重要因素。

抑癌基因是一大类可抑制细胞生长并能潜在抑制癌变作用的基因,PTPN6蛋白作为一种血液和实体恶性肿瘤中的候选肿瘤抑制因子,其表达纯化及与癌症关系的研究,对于肿瘤的研究及抗肿瘤药物的研发至关重要。

[1]PTPN6重组蛋白的真核表达纯化及功能鉴定[J].

[2]PTPN6基因对人食管鳞状细胞癌Eca109和Yes-2细胞恶性生物学行为的影响[J].

回复

使用道具 举报

药徒
发表于 7 天前 | 显示全部楼层
希望针对PTPN6蛋白的抑制剂能够被研发出来。
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 7 天前 | 显示全部楼层
重组蛋白表达与纯化技术在现代生物学发展中起着非常重要的作用
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 6 天前 | 显示全部楼层
感谢楼主分享
回复 支持 反对

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册

本版积分规则

×友情提示
1、无权下载附件会员可能原因:1.“待验证用户组“,请点击注册邮箱里面收到的确认邮件即可; 2.作者设定权限的,提高用户组级别即可
2、对本站的任何疑问或合作需求,请联系微信tank066,关于怎样提高用户组/积分:https://www.ouryao.com/thread-6764-1-1.html
3、注册用户在本社区发表、转载的任何作品仅代表其个人观点,不代表本社区认同其观点。
4、如果存在违反国家相关法律、法规、条例的行为,我们有权在不经作者准许的情况下删除其在本论坛所发表的文章。
5、所有网友不要盗用有明确版权要求的作品,转贴请注明来源,否则文责自负。

QQ|手机版|蒲公英|ouryao|蒲公英 ( 京ICP备14042168号 京ICP证150354号 )

GMT+8, 2019-4-22 15:04 , Processed in 0.135060 second(s), 42 queries .

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2012 Comsenz Inc.

返回顶部