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[化验室分析] 端粒酶活性检测方法之端粒重复扩增法

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药徒
发表于 2019-7-12 13:15:44 | 显示全部楼层 |阅读模式

研究发现肿瘤细胞的无限增殖行为与端粒酶的活性密切相关,在大多数人体肿瘤组织中证实了端粒酶的激活现象,一般来说,检测端粒酶活性能早期诊断大多数肿瘤。一些公司提供的酶活性检测服务,可以测定血清或血浆中酶的催化活力。端粒重复扩增法TRAP是端粒酶的一种直接检测方法。

端粒酶是一个核糖核蛋白体,以RNA和蛋白质组成,具有逆转录酶活性,能以自身RNA为模板从头合成端粒序列,以补偿细胞分裂时染色体端粒的缩短,维持端粒的长度,保持染色体的稳定性。端粒酶基因的激活出现在85%-90%的癌细胞中,其作用是保持端粒的长度和结构,使癌变细胞永生化。通过酶活性检测方法检测标本中的端粒酶活性有可能成为某些恶性肿瘤诊断、筛选的标记物,有助于抗肿瘤药物的研发。美迪西提供酶活性检测服务,可通过酶水平测定、细胞水平测定、细胞生物学、生物化学、体外同位素测定、稳定细胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技术等,提供一套完整的生物学服务。

TRAP是端粒酶活性检测的一种方法,TRAP法有2个反应,以TS(5’-AATCCGTCGAGAGTT-3‘)为上游引物和底物,通过激活端粒酶将TTAGGG逐个加到TS的3’端,合成端粒重复序列,用放射性同位素标记产物。利用下游引物CX和上游引物TS对合成的端粒序列进行PCR扩增延伸产物。2个反应按顺序进行,通过石蜡层进行区分。每合成1个TTAGGG重复序列后,重新定位RNA模板。SDS—PAGE的梯状条带相差6bp。

通过TRAP法检测癌组织及癌组织旁边的端粒酶活性,发现端粒酶特异地表达与绝大多数肿瘤细胞,同时又是肿瘤细胞无限增殖所必须的。因此在今后针对端粒酶的肿瘤基因治疗具有广阔的发展前景。端粒酶抑制剂也成为目前肿瘤治疗研究的热点之一,值得去研究和探索。

1、TRAP法检测原发性肝癌及癌旁组织端粒酶活性的研究

研究者检测原发性肝癌及癌旁组织端粒酶活性并探讨端粒酶活性在原发性肝癌中的临床意义[1]。方法是应用端粒重复序列扩增法检测36例原发性肝癌及癌旁组织和3例正常肝组织端粒酶活性。结果发现36例原发性肝癌组织有29例(80.6%)阳性,而36例癌旁组织只有4例(11.1%)阳性,3例正常肝组织均阴性。4例癌旁组织端粒酶阳性的患者均于术后半年内复发。研究发现原发性肝癌癌旁组织端粒酶活性可望成为预测原发性肝癌术后复发的重要指标,对患者术后治疗方案的选择以及术后随访观察具有一定的指导意义。

2、TRAP法检测胃癌组织中端粒酶活性的研究

有研究者研究了胃癌组织、癌旁及远端正常胃组织中的端粒酶活性,探讨其作为胃癌肿瘤标记物的可能性[2]。方法是采用TRAP-ELISA法检测了51例胃癌组织、癌旁及远端正常胃组织的端粒酶活性表达。结果发现51例胃癌组织中端粒酶阳性表达48例(94.1%),癌旁组织为17例(33.3%),远端正常胃组织未检测出端粒酶活性。因此端粒酶是特异性较强的恶性肿瘤基因标志,有可能成为胃癌早期诊断和治疗的理想标记物。

还有研究者采用了TRAP法观察了人肝癌细胞、小鼠白血病细胞、人肺癌细胞、人鼻咽癌细胞和新鲜乳腺癌组织转移淋巴细胞中端粒酶的活性,发现部分出现阳性表达。进行端粒酶表达与肿瘤细胞间的关系研究,探讨肿瘤组织细胞中的端粒酶表达在肿瘤发生、发展、诊断、治疗以及预后判断中的作用,具有重要意义。目前已经出现了TRAP的各种改良方法用于端粒酶活性的直接检测,检测方法灵敏、迅速且重复性好,应用较为广泛。

[1]应用端粒重复序列扩增法检测原发性肝癌组织端粒酶活性的研究[J].

[2]端粒重复序列扩增法检测胃癌组织中端粒酶活性研究[J].


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药徒
发表于 2019-7-12 18:03:44 | 显示全部楼层
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