Vero细胞冻存问题

小飞鱼爱太阳

目前在养Vero细胞，冻存再复苏后发现细胞悬浮很多，换液之后4天长满。
我的冻存过程是：2~8℃ 放2h，-20℃以下放2h，-70℃以下过夜，之后放于液氮中。冻存液：20%牛血清+5%DMSO
我的复苏过程是：37℃快速融化，没有离心直接加到培养基中培养，隔天换液。
我有以下几个问题想请教养过Vero细胞的前辈：
1、冻存的程序是不是放2~8℃和-20℃过长？我看见好多都只是放半小时。养过Vero细胞的前辈都是放多久？
2、冻存液的配方有无问题？
3、复苏之后不离心是不是也会造成悬浮细胞过多？

谢谢解答

lszeric

1. 程序降温，可以探讨。3. 离心把DMSO弄掉

十八有点呆

占个楼，看看大神怎么说？

williams1

我之前也尝试过梯度冻存，后来觉得麻烦，就直接扔到液氮里面，不过复苏情况也比较良好。
另外DMSO要多离心几次去除。低浓度的DMSO对细胞是有毒性的。

小飞鱼爱太阳

williams1 发表于 2019-10-8 13:59
我之前也尝试过梯度冻存，后来觉得麻烦，就直接扔到液氮里面，不过复苏情况也比较良好。
另外DMSO要多离心 ...

你好，冻存的也是Vero吗？

williams1

小飞鱼爱太阳 发表于 2019-10-8 14:10
你好，冻存的也是Vero吗？

不好意思，打字打得快，没有提前述说清楚。
我当时做的是CHO细胞，还有293T细胞。
除了原代细胞，传代细胞真的没有那么娇嫩，除非你买到的是质量有问题的。呵呵。
vero细胞查了查，属成纤维细胞，与CHO的形态区别不是很大，应该很好保存的。