洋葱伯克霍尔德菌如何检验？

Oxytech奥克泰士

先说结论两点，帮你把“思路”掰正：

• 纯化水做“洋葱伯克霍尔德菌群（BCC）”方法学适用性属于《特定微生物检查》的范畴（等同于药典1106思路），不算微生物计数法（1105），因此不做回收率计算；判定是能否检测到目标菌、阴性是否无菌落、选择性培养基是否对目标/非目标表现出正确的增抑长特性。
  
• 接种（加菌）要在过滤之前与供试品一起进入体系，不能先把供试品过滤完再把菌滴到滤膜上——那样验证不到“基质/方法可能的抑制作用”。
  
  
  
  

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一、你列的验证步骤，推荐这样修正以膜过滤法为例（纯化水通常用膜滤，0.45 µm）：
1）试验组（供试品加目标菌）

• 取与日常检验一致的体积（建议100 mL纯化水；若前期探索阶段可小体积，但最终应与常规检验体积一致）。
  
• 加入**≤100 CFU的洋葱伯克霍尔德菌群代表株到这100 mL里，轻摇混匀后一起过滤**。
  
• 必要时用无抑制的冲洗液（如pH 7.0缓冲液，含中和剂与否视产品而定；纯化水一般可不洗或少量冲洗）冲洗滤膜。
  
• 将滤膜转贴BCC选择性琼脂（如培养基说明书/药典指定的选择性培养基），30–35 ℃培养，观察至72 h内（不超过3天），24/48/72 h逐次判读。
  
• 期望：出现典型/可疑的BCC菌落（形态按培养基说明书判读），并做至少一株的确认（见后述“确认”）。
  
  
  
  

2）阳性对照（方法阳性）

• 以pH 7.0缓冲液100 mL代替供试品，加**同量（≤100 CFU）**的BCC，其他同试验组。
  
• 期望：生长良好（证明方法/培养基可检出）。
  
  
  
  

3）供试品对照（方法阴性/基质空白）

• 纯化水不加菌，同法过滤并培养。
  
• 期望：无生长（排除污染；若个别杂菌生长需评估是否与选择性、环境或操作有关）。
  
  
  
  

4）阴性对照（试剂空白）

• 1 mL缓冲液（或与阳性对照同批缓冲液）过滤并培养。
  
• 期望：无生长。
  
  
  
  

以上为特定微生物检查的“方法学适用性”：不做回收率，而是看试验组与阳性对照均阳性、两类阴性对照均阴性即可判定方法对该基质有效。

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二、是否只看形态？——需要形态 + 必要的确认

• 选择性培养基上的典型菌落形态是第一步，但不能仅以形态判定。
  
• 推荐做至少一株的确认（任选典型菌落）：
  
  
  
  
  • 转接到非选择性培养基观察，再做生化/快速鉴定（如MALDI-TOF、商业鉴定卡），或使用第二种选择性/鉴别培养基进行复核；
    
  • 实验室条件允许时可用**分子法（如特异性PCR）**作进一步确认。
    
    
    
    
• 验证阶段记录：典型形态描述、确认方法与结果。
  
  
  
  

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三、关于“洋葱伯克霍尔德菌群选择性琼脂”的培养基适用性检查（培养基自身验证）你提到的“五个菌（3株目标BCC代表株 + 2株非目标：铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌）”，都要做。思路是“生长促进性 + 抑制性/选择性”。
做法要点：

• 接种量：各菌制成适宜菌悬液，取**≤100 CFU**/平板。
  
• 接种方式：直接在选择性平板表面涂布（不用过滤），用无菌涂布棒均匀涂开。
  
• 培养条件：与实测一致，30–35 ℃，观察至72 h内（不超过3天），分时判读。
  
• 判定：
  
  
  
  
  • 目标菌（BCC代表株）：应能生长，并呈典型/预期形态；菌落数与接种量大致相符（允许选择性导致适度减少，但应清晰可检）。
    
  • 非目标菌（P. aeruginosa、S. aureus）：应被抑制（不长或极少、且不呈典型BCC形态）。
    
    
    
    
• 同时做一组非选择性平板（如TSA）生长促进性，确认所有试验菌处于可培养状态。
  
  
  
  

注：BCC为“菌群/复合群”，药典常列多株代表菌用于覆盖选择性谱。你实验室可按药典列名或培养基说明书推荐的ATCC/CMCC 等标准株开展。

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四、几个常见易错点（帮你对照）

• 先滤后加菌（你原方案第1步）会低估基质/方法对检出率的影响，不符“方法学适用性”的本意——应与供试品同滤。
  
• 只看形态不够，至少要做一次确认试验。
  
• 体积不一致：验证体积应尽量与常规检验体积一致（通常100 mL），否则验证外推性差。
  
• 只做目标菌：培养基适用性需目标 + 非目标；而“方法学适用性”至少要有阳性对照 + 阴性对照，必要时加环境阴性。
  
• 读板太早：BCC在部分选择性基质上生长偏慢，建议24/48/72 h分时记录，最长不超过3天。
  
  
  
  

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五、日常检验提示（做完验证后的常规做法）

• 常规“纯化水 BCC 监测”多采用：一定体积（如100 mL）膜滤 → 选择性平板培养 30–35 ℃ ≤3天 → 典型菌落挑取确认 → 报告阴/阳性。
  
• 是否把BCC纳入纯化水的日常“控制菌”，取决于工厂产品谱和风险评估（尤其非无菌水性制剂/高风险外用水剂）。若纳入控制菌监测，方法学适用性就按上文一次性做足并归档。
  
  

为了微生物

用了AI，至少也看看药典怎么做的，再发出来吧？

机智鼠

回复：

关于洋葱伯克霍尔德菌（BCC）的检验，首先需明确的是其检测属于《特定微生物检查》范畴，而非微生物计数法。因此，在进行方法学适用性验证时，主要关注能否检测到目标菌、阴性结果是否无菌落生长，以及选择性培养基对目标和非目标菌株是否表现出正确的增抑长特性。

接种（加菌）过程应在过滤供试品之前进行，确保能够评估基质或方法可能对微生物生长产生的抑制作用。以下是修正后的验证步骤建议：

1. 试验组（供试品加目标菌）：
   - 取与日常检验一致的体积（例如100 mL纯化水），若为探索阶段可使用较小体积，但最终应与常规检验体积一致。
   - 加入≤100 CFU的洋葱伯克霍尔德菌群代表株至这100 mL中，轻摇混匀后一起过滤。
   - 根据需要使用无抑制的冲洗液（如pH 7.0缓冲液，含中和剂与否视产品而定；纯化水一般可不洗或少量冲洗）冲洗滤膜。
   - 将滤膜转贴至BCC选择性琼脂平板上培养，以观察目标菌的生长情况。

以上步骤依据《中国药典》2020年版四部通则1106“特定微生物检查”的相关要求制定。在进行此类验证时，还需参考具体的法规指南以确保符合所有相关规定。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

Oxytech奥克泰士

为了微生物 发表于 2025-10-10 10:03
用了AI，至少也看看药典怎么做的，再发出来吧？

您好，这是实际意义，内容问答是由问询人提出的问题作答，参考通则1106以及方法学验证或许对你有更大的帮助理解！

为了微生物

Oxytech奥克泰士 发表于 2025-10-11 08:43
您好，这是实际意义，内容问答是由问询人提出的问题作答，参考通则1106以及方法学验证或许对你有更大的帮 ...

和鼠鼠用的一个AI？
1106有BCSA吗？有培养时间吗？不用TSB增菌吗？

Oxytech奥克泰士

为了微生物 发表于 2025-10-11 09:05
和鼠鼠用的一个AI？
1106有BCSA吗？有培养时间吗？不用TSB增菌吗？

再次给您回复，这是由个人根据问题回答出的，您可以去看一下ai能否给出这样的答复。