求助：关于紫外计算

wang66

求助：最近刚到一个公司，突然发现他们的紫外检验记录的计算和自己以前的不一样！现在向各位前辈求证,看哪种算法正确，关于某产品药典要求是这样子的：

对照品溶液的制备  取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖60mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水葡萄糖0.6mg)。

标准曲线的制备  精密量取对照品溶液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml，分别置50ml量瓶中，各加水至刻度，摇匀。分别精密量取上述溶液2ml，置具塞试管中，各精密加4％苯酚溶液1ml，混匀，迅速精密加入硫酸7ml，摇匀，置40℃水浴中保温30分钟，取出，置冰水浴中放置5分钟，取出，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（附录Ⅴ A）在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法  取金樱子肉粗粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水50ml，称定重量，静置1小时，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取2ml，置具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“各精密加4％苯酚溶液1ml"起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中金樱子多糖的重量(μg)，计算，即得。

他们的计算：

对照品浓度	0.6	mg/ml
标准曲线
取样量（ml)	0.5	1	1.5	2	2.5
浓度C（mg/ml）	0.012	0.024	0.036	0.048	0.06
吸光度A	0.095	0.198	0.322	0.438	0.562

标准线性是：y=9.7833x-0.0292
供试品：m1=0.5014g     m2=0.5008        水分：10.1%
吸光度：A1=0.203       A2=0.201
含量1=（0.203+0.0292）/9.7833*50/2*100/25*50/1/0.5014/1000/（1-10.1%）*100=26.3671%
含量2=（0.201+0.0292）/9.7833*50/2*100/25*50/1/0.5008/1000/（1-10.1%）*100=26.1316%

平均值=26.2293%


我原来公司计算是这样的：

对照品浓度	0.6	mg/ml
标准曲线
取样量（ml)	0.5	1	1.5	2	2.5
浓度C（mg/ml）	0.006	0.012	0.018	0.024	0.03
吸光度A	0.095	0.198	0.322	0.438	0.562

标准线性是：y=19.567x-0.0292
供试品：m1=0.5014g     m2=0.5008        水分：10.1%
吸光度：A1=0.203       A2=0.201
含量1=（0.203+0.0292）/19.567*50*100/25*50/1/0.5014/1000/（1-10.1%）*100=26.3265%
含量2=（0.201+0.0292）/19.567*50*100/25*50/1/0.5008/1000/（1-10.1%）*100=26.1311%

平均值=26.2288%

请问哪个计算是正确的？？？

salihamijiqi

他们对，你们标曲浓度弄错了

pussay11

对照品浓度       
0.6
mg/ml
标准曲线       
取样量（ml)       
0.5
1
1.5
2
2.5
浓度C（mg/ml）       
0.012
0.024
0.036
0.048
0.06
吸光度A       
0.095
0.198
0.322
0.438
0.562

浓度错了吧··0.6mg/ml*0.5ml/50ml*2ml/10ml=0.0012，好像都放大了10倍了吧

wang66

salihamijiqi 发表于 2015-8-13 22:26
他们对，你们标曲浓度弄错了

他们的标准曲线浓度对吗？？？

wang66

pussay11 发表于 2015-8-14 08:43
对照品浓度       
0.6
mg/ml

标准溶液为何还要除与10呢？？？这个10是不是2+1+7=10得来呢？不同的溶液体积不能这样简单的相加吧？

hongwei2000

方法真烂
苯酚溶液和硫酸本身就是过量的
但为了定量就必须要精密量取
设计的人不知道长的是什么脑子
不能后面有个定容
让设计的人精密量取硫酸7ml看看方便不

pussay11

hongwei2000 发表于 2015-8-14 08:57
方法真烂
苯酚溶液和硫酸本身就是过量的
但为了定量就必须要精密量取

应该是用硫酸加至刻度。。。7ml我没见过这个容量的移液管。如果用刻度吸管的话，应该是量取，而不是精密量取？

hongwei2000

pussay11 发表于 2015-8-14 09:04
应该是用硫酸加至刻度。。。7ml我没见过这个容量的移液管。如果用刻度吸管的话，应该是量取，而不是精密量 ...

进口有7ml的移液管
关键是本身就黏乎乎的不可能很好定量
流出时间也不好控制
还迅速加！
写标准的人可能都没做过试验
方便完全可以使用经检定的10ml比色管操作
硫酸的量可以是5ml
苯酚溶液和硫酸都不需要精密量取
反应完后加水稀释至10ml就好了

ywz

这检测方法也有问题吧。后面应该加个定容的，不能说2+1+7就是10ml了。。。

wang66

pussay11 发表于 2015-8-14 09:04
应该是用硫酸加至刻度。。。7ml我没见过这个容量的移液管。如果用刻度吸管的话，应该是量取，而不是精密量 ...

这个操作标准都是药典“金樱子含量测定”项下的标准操作描述。我个人就觉得郁闷！原先我和你一样不管是对照品标准曲线还是供试品溶液计算时的稀释倍数都出院10即：2+1+7=10ml后面想想这个没有说服力，毕竟不同溶液介质混合，它的体积不是当纯的各个溶液体积相加就是最终的体积！所以我就一直想问这个稀释倍数是否指的是“置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取2ml，置具塞试管中”计算到此而止，毕竟后面添加的试液操作不管是样品还是对照品标准曲线溶液都是一样的！

wang66

ywz 发表于 2015-8-14 09:20
这检测方法也有问题吧。后面应该加个定容的，不能说2+1+7就是10ml了。。。

那是国家药典要求这样操作啊！我们也没办法改变啊

salihamijiqi

wang66 发表于 2015-8-14 09:26
这个操作标准都是药典“金樱子含量测定”项下的标准操作描述。我个人就觉得郁闷！原先我和你一样不管是对 ...

标准不严谨，但是他的意思就是忽略体积误差，认为精密量取2,1，7后体积就是10.算不上太大的问题，那点误差基本影响不大

wang66

salihamijiqi 发表于 2015-8-14 09:33
标准不严谨，但是他的意思就是忽略体积误差，认为精密量取2,1，7后体积就是10.算不上太大的问题，那点误差 ...

若有空，大家可以翻看一下中国药典第一部关于紫外检测操作的产品在标准曲线溶液和对照品溶液制备上基本上都是这样操作，我们不能一概而论的说他的方法存在问题，这样子操作肯定有他的道理，当初在学校时老师好像也是这么教的，也问过好多这里的大学生，咨询他们以前老师怎么教他们计算的，他们也说像和我计算的那样，对照品标准曲线浓度和供试品溶解计算时不用除以10ml.如果按照大家这样说，那灵芝做紫外，大家怎么算它的标准曲线浓度？？灵芝相关药典检测含量标准是这样的<紫外-可见分光光度法>

"标准曲线的制备  分别精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(精密称取蒽酮0.1g，加80％的硫酸溶液100ml使溶解，摇匀)6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放入冰浴中冷却15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（附录V A），在625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备  取本品粉末约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90ml，电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取10ml，加入乙醇150ml，摇匀，4℃放置12小时，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，转移至50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

测定法  精密量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。"

salihamijiqi

wang66 发表于 2015-8-14 09:48
若有空，大家可以翻看一下中国药典第一部关于紫外检测操作的产品在标准曲线溶液和对照品溶液制备上基本上 ...

没做过中药，化药里面基本不这样。其实说白了就是一个一部和二部的习惯问题，药典会化药处有化药处的习惯，中药处有中药处的习惯，就像很多抗生素的溶出度对照都不用对照品去配制而用供试品，其他的化药都用对照品，不用太过纠结

wang66

答案是什么？怎么计算稀释倍数合理？？？？求解

wang66

依我个人的观点是这样的，不知道这样理解是否对不对？还望大家当指点一下：
1.不管怎么计算，可以肯定的是不管标曲各点的浓度和供试品溶液的浓度物质的量是不便的。
2.从配置的操作步骤来看，后面几步操作步骤不管是是从添加试剂量还是处理的条件和稀释倍数来看都是一模一样的，那么我们能否不管后面这些操作相同不做所稀释的对应出来的浓度，而是直接把浓度转换成每个标曲对应点的物质的量，因为再怎么稀释，最终结果物质的量是不会变的，毕竟体积相同，浓度和对应的吸光度成梯度线性关系，那么他对应的物质的量和对应的吸光度也应该成梯度线性关系。毕竟一个容易的吸光度是唯一的。
3.根据线性关系，供试品的计算处理过程中能否按照吸光度和物质的量来处理计算呢？
  我不知道这样的理解是否对不对，还希望各位同仁帮指点一下。