细胞产品的无菌检测直接接种法方法学适用性

锥锥

做方法学适用性，细胞悬液加到TSB里，细胞沉到底部，看着就像白色念珠菌，这种情况，大家是怎么判断白念这组的？

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不见猫骨头

是不是可以考虑转接
不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液不少于1ml转种至同种新鲜培养基中，将原始培养物和新接种的培养基继续培养不少于4天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。

锥锥

不见猫骨头 发表于 2025-11-07 12:21
是不是可以考虑转接
不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液不少于1ml转种至同种新鲜培养基中，将原始培养物和新接种的培养基继续培养不少于4天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。

有道理，但是法规上没有这么说，我做了，能算适用性通过吗

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不见猫骨头

锥锥 发表于 2025-11-7 15:28
有道理，但是法规上没有这么说，我做了，能算适用性通过吗

1101 结果观察与判断中有这句话，我是这样想的既然检查可以这样操作，方法适用性也是可以的，毕竟检查是根据方法适用性报告做的

锥锥

不见猫骨头 发表于 2025-11-07 16:58
1101 结果观察与判断中有这句话，我是这样想的既然检查可以这样操作，方法适用性也是可以的，毕竟检查是根据方法适用性报告做的

但是方法适用性不是要五天之内菌能生长良好，才能证明这个方法没有干扰不是？自己又延长时间，那只能证明延长时间和培养环境后菌能长起来

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不见猫骨头

锥锥 发表于 2025-11-10 10:23
但是方法适用性不是要五天之内菌能生长良好，才能证明这个方法没有干扰不是？自己又延长时间，那只能证明 ...

不冲突，你是不能从外观上判断是否有微生物生长从而进行转接培养，所以你这不算是延长培养时间；毕竟你方法适用性还是不超过5天，转接培养不少于4天是为了确认它里面是否有微生物；如果转接后它能正常生长也能说明它没有干扰，毕竟就算TSB是10ml，你加入1ml不大于100cfu/ml的菌进去，整体来说在TSB中含菌量不大于10cfu/ml，如果真的有干扰，转接后它是不会生长的

呆呆戴

如果细菌菌体接种于半固体培养基中或液体培养基中，是不能形成菌落的。在半固体培养基中，接种的无鞭毛的细菌只沿着穿刺线生长，而有鞭毛的细菌可在穿刺线的周围扩散生长。细菌菌体接种于液体培养基中，细菌生长后能使液体培养基变得混浊。混浊情况视细菌对氧气需求的不同而有所不同：好氧菌仅使上部培养液混浊，厌氧菌使底部培养液混浊，兼性厌氧菌使培养液上下均匀混浊；有的细菌可在培养液表面形成菌环或菌膜，或在底部产生沉淀。 根据的描述，应该不是白色念珠菌，1是白念是兼性厌氧，应在培养基中均匀分布时期浑浊不清；2是白念无鞭毛，会沿穿刺线生长（就像杨柳枝）；但若非细胞沉淀的情况下，不排除其他厌氧菌的可能。另外一点就是药典规定的很多东西就比如细菌，真菌培养不得超过几天几天，很大部分是给了一个模糊的界限，或者是完全抄着欧美药典来的，对照菌是那几种是定死的（代表绝大部分菌种），但结合各个地方的实际，很有可能出现特定的奇奇怪怪的菌株，尤其是里面有细胞的情况下，这一点就会和之前偏向于化药的无菌检查法就有偏差，个人理解

呆呆戴

锥锥 发表于 2025-11-10 10:23
但是方法适用性不是要五天之内菌能生长良好，才能证明这个方法没有干扰不是？自己又延长时间，那只能证明 ...

我觉得你可以转种在涂布，大概率会长出一些细胞或者生物膜状物，然后去测序鉴定菌种，然后测不出来，作为方法学确认的补充，方法确认就是结果是无菌的，至于怎么判断出来的你自己有一个补充说明依据就行。

锥锥

呆呆戴 发表于 2025-11-10 15:18
我觉得你可以转种在涂布，大概率会长出一些细胞或者生物膜状物，然后去测序鉴定菌种，然后测不出来，作为方法学确认的补充，方法确认就是结果是无菌的，至于怎么判断出来的你自己有一个补充说明依据就行。

有道理，谢谢

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锥锥

不见猫骨头 发表于 2025-11-10 12:44
不冲突，你是不能从外观上判断是否有微生物生长从而进行转接培养，所以你这不算是延长培养时间；毕竟你方法适用性还是不超过5天，转接培养不少于4天是为了确认它里面是否有微生物；如果转接后它能正常生长也能说明它没有干扰，毕竟就算TSB是10ml，你加入1ml不大于100cfu/ml的菌进去，整体来说在TSB中含菌量不大于10cfu/ml，如果真的有干扰，转接后它是不会生长的

有道理，我还有个问题，如果做方法学验证发现黑曲霉生长缓慢，但第五天也能看见长起来，但相比对照管来说，菌有点少，这种情况，方法适用性是不是通不过？

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不见猫骨头

锥锥 发表于 2025-11-13 13:24
有道理，我还有个问题，如果做方法学验证发现黑曲霉生长缓慢，但第五天也能看见长起来，但相比对照管来说 ...

这样的话说明抑菌性还是比较强的，方法适用性不能完全适用，还是再优化一下