去热原器具有效期验证---求助+讨论....

酋长 · 发表于 2013-2-26 22:15:51

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本帖最后由溪河殇于 2013-2-26 22:19 编辑

最近在做去热原器具的储存有效期验证，实验思路大致如下，求各位大神指点一下，看是否可行。{:soso_e103:}
   首先准备先用5*5载体代替器具进行除热原，然后再放于专用柜中保存，达到预定存放时间后，取出载体，通过淋洗法洗脱载体表面可能存在的内毒素（每块载体用8mlBET水淋洗），然后采用凝胶法进行内毒素检测。
试验选用鲎试剂的灵敏度为0.015EU/ml，对于合格标准，大致想了3种方法。
方法一：
   直接取淋洗液进行内毒素检测，只有当淋洗液的内毒素含量低于0.015EU/ml时，试验有效。
方法二：
   暂定合格标准为每块载体上期内毒素含量应小于0.015EU，然后分别取淋洗液与BET水稀释标准品，依据鲎试剂灵敏度复核原理进行试验，通过计算各组反应终点浓度的几何平均值，来计算2种方法制备的内毒素溶液中的内毒素浓度，比较两者的差值。
   合格标准：只有当淋洗液稀释组的计算浓度-BET水稀释组的计算浓度＜（0.015/8）时实验有效。
方法三：
   取内毒素标准品溶液，梯度稀释至所用BET水的限制（0.003EU/ml），通过摸索0.003EU/ml的内毒素溶液与0.015EU/ml灵敏度的鲎试剂反应形成阳性结果的最短时间T，然后取载体淋洗液与0.015EU/ml灵敏度的鲎试剂进行凝胶反应，在相同的时间(T)内，只有当结果呈阴性时，试验有效。

酋长 · 发表于 2013-2-27 18:06:54

哎，怎么就没人啊 ....

seamen · 发表于 2013-2-27 19:03:29

为什么用载体不直接用容器？

酋长 · 发表于 2013-2-27 19:37:33

seamen 发表于 2013-2-27 19:03
为什么用载体不直接用容器？

不用载体怎么把器具表面可能存在的内毒素洗脱？？？

秋风819 · 发表于 2013-2-27 20:14:36

路过，学习学习

seamen · 发表于 2013-2-28 11:37:10

溪河殇发表于 2013-2-27 19:37
不用载体怎么把器具表面可能存在的内毒素洗脱？？？

这个验证我们也没做过，不过我觉的首先是实验方法，你们内毒素清洗效果确认是怎么做的？我觉的一样就行。在一个是标准，没有必要定的那么高

456公里 · 发表于 2013-2-28 11:44:14

热原不会凭空而生的

酋长 · 发表于 2013-2-28 17:49:21

seamen 发表于 2013-2-28 11:37
这个验证我们也没做过，不过我觉的首先是实验方法，你们内毒素清洗效果确认是怎么做的？我觉的一样就行。 ...

内毒素的回收试验是通过在载体表面涂抹一定量的内毒素溶液，然后把载体放于净化台上晾干，最后通过加BET水淋洗载体表面，通过检测淋洗液中的内毒素含量，计算回收率。

酋长 · 发表于 2013-2-28 17:54:32

seamen 发表于 2013-2-28 11:37
这个验证我们也没做过，不过我觉的首先是实验方法，你们内毒素清洗效果确认是怎么做的？我觉的一样就行。 ...

关键是不知道淋洗液中的内毒素怎么定，如果按0.015EU/ml来，倒推后发现载体上的内毒素限值又太大。
最近又想到一个累加的方法，就是用淋洗水重复淋洗其它载体，但仍然把最终淋洗液的内毒素限制定位0.015EU/ml，通过增加淋洗载体整体数目，从而降低每块载体上的内毒素限制。

酋长 · 发表于 2013-2-28 17:55:54

456公里发表于 2013-2-28 11:44
热原不会凭空而生的

热原是不会凭空产生，当如果器具没保存好，导致被环境中的细菌污染了，又怎么办？？？

seamen · 发表于 2013-3-1 08:41:14

除热源后，放置在规定的条件下储存，到期后通过加BET水淋洗载体表面，通过检测淋洗液中的内毒素含量，看是否超标，我们定这种标准按水的标准。个人见解

egleeber · 发表于 2013-3-1 11:26:28

有机会的话可以询问下“湛江安度斯”他们的去热源的试管已经做过验证了。

我记得结果是：铝箔纸包裹、置于铁盒\密闭内保存，有效期可以达到1年。

另，我们也一直想做去热源的验证。但还没有执行。

我个人觉得，验证嘛，首先要符合实际。

我们用的是5、12mL试管和动态反应管嘛，所以验证时肯定会与实际相符。

另看到您所说的“涂抹一定内毒素”，我想这个验证项目应与干烤箱验证相同，用“干烤指示剂”可以完成了。不知道这个是否是我理解的意思。

关于如何证明校期的方法和标准，确实是可以商讨下。暂无确切思路。

酋长 · 发表于 2013-3-1 18:07:42

egleeber 发表于 2013-3-1 11:26
有机会的话可以询问下“湛江安度斯”他们的去热源的试管已经做过验证了。

我记得结果是：铝箔纸包裹、 ...

在载体上涂抹内毒素，然后淋洗检测，只是为了证明我这个淋洗方法能把载体表面可能存在的内毒素洗脱下来。

关于安度斯的试管有效期验证。听他们说如果是凝胶法的话，可以通过延长淋洗液的反应时间找到一个使淋洗液刚好呈阳性结果的时间，然后对比BET水或者用等倍稀释的内毒素溶液摸出此时能产生凝胶反应的内毒素浓度、具体思路好像是这样.....记的不太清了

egleeber · 发表于 2013-3-4 08:58:15

溪河殇发表于 2013-3-1 18:07
在载体上涂抹内毒素，然后淋洗检测，只是为了证明我这个淋洗方法能把载体表面可能存在的内毒素洗脱下来。 ...

不好意思我不太明白您是什么意思

“通过淋洗液的反应时间” 指的是“淋洗载体的时间”？

酋长 · 发表于 2013-3-4 18:08:50

egleeber 发表于 2013-3-4 08:58
不好意思我不太明白您是什么意思

“通过淋洗液的反应时间” 指的是“淋洗载体的时间”？

是去淋洗载体所得溶液进行凝胶试验，延长凝胶反应的时间，找出淋洗液呈阳性时的反应时间

youkudianying · 发表于 2013-3-4 20:43:47

学习

Ivy2008 · 发表于 2013-9-23 10:34:33

您好!我也在做这方面的验证，有以下几个问题：1 我和厂家联系过，听说0.015EU/ml的鲎试剂厂家不出报告，也就是厂家不对这种鲎试剂的灵敏度负责，验证怎么能用呢？ 2 为什么要定的标准是0.015EU/ml,这个标准从哪里来的？

酋长 · 发表于 2013-9-23 16:18:15

Ivy2008 发表于 2013-9-23 10:34
您好!我也在做这方面的验证，有以下几个问题：1 我和厂家联系过，听说0.015EU/ml的鲎试剂厂家不出报告，也就 ...

额 0.015EU/ml的鲎试剂有报告书的啊，我们这边买的安度斯的都有。
0.015EU/ml这个限值是参考药典中对BET法中BET水的要求制定的。

Ivy2008 · 发表于 2013-9-24 10:13:49

溪河殇发表于 2013-9-23 16:18
额 0.015EU/ml的鲎试剂有报告书的啊，我们这边买的安度斯的都有。
0.015EU/ml这个限值是参考药典中对BE ...

啊？奇怪了，我们也买的安度斯的，说是不发报告

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