面积归一法计算含量的怎么做准确度？

小行星ji5

想请教各位大神，硬脂酸这个辅料中国药典检测含量用的是气相色谱法按照面积归一法计算硬脂酸含量、硬脂酸合棕榈酸总量。想问一下，这个方法做方法确认时，我要做准确度，取硬脂酸、棕榈酸对照品，配成80%，100%，120%的浓度去进样。但是进样后面积归一法只能在图普上看硬脂酸、棕榈酸占的含量百分比，这样怎么去测回收率？？

世间始终你好

可以做的——思路是“基线测定 + 加标-同瓶复测”，把面积归一得到的“百分比”换回“质量份额”，再按常规加标回收率公式计算即可。做法如下：
怎么做“准确度（回收率）”关键：先测“未加标”的含量，再在同一瓶里加入已知质量的硬脂酸/棕榈酸对照品，按药典制样流程一起处理、进样，用两次测得的质量差与加标量求回收率。
步骤

• 基线样（未加标）
  
  
  • 取样 m（g），按药典步骤制样、进样 n=3–6。
    
  • 由面积归一法得到两峰的百分比：
    fSA,0f_{SA,0}%（硬脂酸），fPA,0f_{PA,0}%（棕榈酸）。
    
  • 换算为样品中两者的“基线质量”：
    mSA,0=fSA,0100×m,mPA,0=fPA,0100×mm_{SA,0}=\frac{f_{SA,0}}{100}\times m,\qquadm_{PA,0}=\frac{f_{PA,0}}{100}\times m（若方法只归一化SA+PA两峰，上式成立；若把其它脂肪酸也计入总峰，则应把分母改为“SA+PA+其它”之和对应的质量份额；原则是不改变你归一的“总量”。）
    
    
• 加标样（同一体系）
  
  
  • 在同一类样品中称取相同 m（或直接在第2瓶中称 m），加入对照品
    sSA={0.8, 1.0, 1.2}×mSA,0,sPA={0.8, 1.0, 1.2}×mPA,0s_{SA}=\{0.8,\ 1.0,\ 1.2\}\times m_{SA,0},\quads_{PA}=\{0.8,\ 1.0,\ 1.2\}\times m_{PA,0}（80/100/120%三个水平，可分别只加SA、只加PA或同时加，两种设计都行；常用的是分别加标，便于分别评估两者的回收。）
    
  • 加标后该瓶总质量：
    m′=m+sSA+sPAm' = m + s_{SA}+s_{PA}
  • 按药典同法制样、进样，得归一百分比：
    fSA,1f_{SA,1}%、fPA,1f_{PA,1}%。
    
  • 换算为加标样中测得的质量：
    mSA,1=fSA,1100×m′,mPA,1=fPA,1100×m′m_{SA,1}=\frac{f_{SA,1}}{100}\times m',\qquadm_{PA,1}=\frac{f_{PA,1}}{100}\times m'
    
• 回收率计算
  
  
  • 硬脂酸回收率：
    RecoverySA=mSA,1−mSA,0sSA×100%\text{Recovery}_{SA}=\frac{m_{SA,1}-m_{SA,0}}{s_{SA}}\times 100\%
  • 棕榈酸回收率：
    RecoveryPA=mPA,1−mPA,0sPA×100%\text{Recovery}_{PA}=\frac{m_{PA,1}-m_{PA,0}}{s_{PA}}\times 100\%
    

判定

• 常见接受标准：95.0%–105.0%（辅料/组成测定用归一化法通常放宽到±5%）；若你们SOP或注册资料按“含量测定”口径，可采用98.0%–102.0%。三水平、每水平平行2–3份。
  
  

其它验证点的处理要点（简版）

• 线性：不用矩阵，直接配制多种标准混合比（例如PA:SA = 30:70、40:60、50:50、60:40、70:30），进样后用“测得份额 vs 理论份额”做回归（R²≥0.99，斜率≈1，截距≈0）。
  
• 精密度：同一水平重复制样/进样（RSD一般≤2%）。
  
• 专属性/分离度：用对照品确认保留时间，分离度≥5（药典已给要求）。
  
• 耐用性：柱温、升温程序、进样量的微调对结果的影响。
  
  

小贴士

• 关键是**把归一化的百分比转回“质量份额”**再做加标回收；只要在同瓶里完成“称量→加标→同法处理”，就能像常规外标法一样评价准确度。
  
• 若样品中还有少量其他脂肪酸并计入归一总峰，计算时要用同一“总量”口径保证前后可比；或在SOP中明确“只对SA+PA两峰归一”，保持一致即可。
  
  

小行星ji5

世间始终你好 发表于 2025-8-13 09:56
可以做的——思路是“基线测定 + 加标-同瓶复测”，把面积归一得到的“百分比”换回“质量份额”，再按常规 ...

可不可以使用这种方法：取80%、100%、120%的浓度对照品进样，进样后面积归一法可看出硬脂酸、棕榈酸的含量。这个含量去与对照品COA上标示的含量去比较，算回收率可以吗？

世间始终你好

小行星ji5 发表于 2025-8-13 10:13
可不可以使用这种方法：取80%、100%、120%的浓度对照品进样，进样后面积归一法可看出硬脂酸、棕榈酸的含 ...

不建议那样做，理由有三：

• 这不叫“回收率”
  回收率/准确度验证要评估“样品制备+测定”全过程的偏差，通常用加标到样品中（或空白基质）后再按同法处理来计算。（ICH Q2 的“accuracy by recovery”。）只打对照品溶液，只能反映系统适用性/线性，评不到样品制备和基质影响。
  
• 与COA标示值不在同一口径
  对照品 COA 的含量多按“干燥/水分/残溶修正后”的质量分数给出；而你用面积归一法得到的是相对组成（SA、PA占比）。两者口径不同，且COA的“其它杂质、水分”不会体现在你的归一百分比里，直接比会产生系统偏差。
  
• 无法反映样品基质/处理损失
  仅用对照品溶液没有萃取、转移、干燥、衍生等步骤的损失，得不出“回收”。
  
  

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可行做法（两种）A. 加标-同瓶复测（推荐）
在真实样品中分别加入已知量SA或PA（80%、100%、120%三个水平），全流程处理。
RecoverySA=(测得SA)加标−(测得SA)未加标加入SA×100%\text{Recovery}_{SA}=\frac{(\text{测得}SA)_{\text{加标}}-(\text{测得}SA)_{\text{未加标}}}{\text{加入}SA}\times100\%PA同理。这样既覆盖基质，又口径一致。
B. 人工样／配比准确度（可作为准确度的补充，而非回收）
若样品本身就是脂肪酸混合物、无复杂基质，可用纯度修正后的对照品按称量配成若干已知配比（如SAA = 70:30、60:40…），全流程处理，用“测得份额 vs 理论份额（纯度修正的称量值）”评估准确度/真值偏差与线性。注意：这评的是“trueness”，不是回收。

关键点

• 无论选A还是B，标准品都要做纯度/水分修正再计算理论值。
  
• 面积归一法得到的是相对组分；计算时要把加标后样品的总质量口径一致化，再换算成SA、PA的“测得质量”，再带入公式。
  
  

总结：不能用“归一化测得百分比 vs 标准品COA”来算回收率；请做样品加标回收（方案A），或用纯度修正的人工样来做准确度/线性（方案B）。

依然星期三

用到了对照品也算外标法了，怎么用面积归一法计算含量了

小行星ji5

依然星期三 发表于 2025-8-13 10:22
用到了对照品也算外标法了，怎么用面积归一法计算含量了

对照品是用来定位的

红烧牛肉面

小行星ji5 发表于 2025-8-13 10:37
对照品是用来定位的

其实说的直白一点就是对照品自己含量都没搞明白