关于无菌检查阴性对照的问题

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按我个人理解，做实验和检测时阴性对照应选用无目的物的底液或者纯化水或者稀释液代替样品，执行全部操作。
我在最开始考虑无菌检查实验过程时也是这样想的，不过后来看中检院的《2019生物制品检验技术操作规范》，其中关于薄膜过滤法阴性对照的描述：“供试品检查时。应取相应稀释液、冲洗液同法进行，作为阴性对照”（52页 3.2.2.1.3），关于直接接种法阴性对照的描述：“空白培养基作为阴性对照。”
我的理解是，直接接种法的阴性对照就直接啥都不做，整个管放培养箱去培养；对于薄膜过滤，就取和样品等体积的缓冲液代替操作。
但主管又有新的疑问，①是这俩方法一个阴性对照加溶液，一个不加，她觉得很奇怪，就到底加不加这个问题扯了一点没扯明白。②是如果要加，假设样品是20mL稀释到100mL缓冲液里，阴性对照组的缓冲液过滤20还是100还是120，如果样品100ml原液过滤，那阴性对照组缓冲液过滤100还是就不过滤了？
感谢各位大神，这个问题我真是被主管搞糊涂了，如果有相关的标准文件能列下来供我参考一下就更好了。

jinn512

1.这个和法规没关系，你想一下实验的逻辑就知道了。薄膜过滤法需要冲洗，既然有冲洗的动作，那阴性也要有相应动作控制变量，而直接接种法，变量仅在培养基与样品相遇的一瞬间，和楼上说的一样，需要只需要打开培养基经历相同的环境即可。
2.药典四部1101上面写的是供试品无菌检查时应取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴性对照。实际操作中，我们做法是，一般仅过滤等量的冲洗液，不考虑样品的体积

hhhhhhjjjjj

18730452534 发表于 2026-4-10 08:51
那薄膜过滤的阴性对照是取多少体积呢？这个也是我纠结的问题之一。

和样品滤液保持一致

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空气在流浪 发表于 2026-4-9 19:24
先要知道阴性对照的意义。
直接接种法也不是完全就只有培养基的，比如，用棉签擦拭法取样做无菌的时候，就 ...

不好意思有前提忘了讲了，我们现在制定方法的目标是检查生物制品类的，据我理解和了解都是水溶性供试品，参考的文件也是中检院的《生物制品检验技术操作规范》。

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Shawn001 发表于 2026-4-9 19:04
还是得开一下，有些培养基是有保护的惰性气体，你看一下，事宜微生物生长，有代表性

这个是我完全没考虑到了，感谢指导。

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younx 发表于 2026-4-9 17:51
直接接种法的阴性，你还是要把培养基瓶子打开一下，模拟样品放入

这个是我完全没考虑到了，感谢指导。

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hhhhhhjjjjj 发表于 2026-4-9 17:22
你的理解是对的，直接接种不加

那薄膜过滤的阴性对照是取多少体积呢？这个也是我纠结的问题之一。

空气在流浪

先要知道阴性对照的意义。
直接接种法也不是完全就只有培养基的，比如，用棉签擦拭法取样做无菌的时候，就需要把棉签的浸润液体和未使用过的棉签作为接种物，接种到培养基里作为阴性对照的。

Shawn001

还是得开一下，有些培养基是有保护的惰性气体，你看一下，事宜微生物生长，有代表性

younx

直接接种法的阴性，你还是要把培养基瓶子打开一下，模拟样品放入

hhhhhhjjjjj

你的理解是对的，直接接种不加