【药典讨论】无菌检查法的菌液制备使用的新鲜培养物如何理解？

lov_new · 发表于 2015-9-16 09:06:02

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2015中国药典无菌检查法【菌液制备】接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌的“新鲜培养物”至胰酪胨大豆胨液体培养基。。。。
这里的“新鲜培养物”如何理解，从冷冻冰箱里面取出的标准储备菌株算不算新鲜培养物？

°豆沙包° · 发表于 2017-7-5 14:34:42

炒蛋发表于 2017-6-2 11:00
培养一次，代数增加1.

如果我使用的是新鲜培养物，当我用第五代的菌种培养成新鲜培养物时，我的 ...[/quote]

应该只能用到第四代的菌种，这样培养成新鲜培养物就正好是第五代

yaya19900816 · 发表于 2015-9-16 12:59:11

不算，必须要活化，增菌培养后，才算新鲜培养物

lov_new · 发表于 2015-9-16 13:06:53

不算，必须要活化，增菌培养后，才算新鲜培养物[/quote]
意思是说，无菌检查的时候，标准菌株要活化2次？

冰川陈丽 · 发表于 2015-9-16 13:46:20

活化以后怎么记代数？

锦。 · 发表于 2015-9-16 14:24:43

同等结果！

lov_new · 发表于 2015-9-16 14:31:45

活化以后怎么记代数？[/quote]
培养一次，代数增加1.

红叶舞秋山 · 发表于 2015-9-16 14:55:37

楼上正解啊

我是菁菁 · 发表于 2015-9-16 15:36:46

应该不算，从冰箱中取出在TSA/SDA平皿中培养适当时间，这时候长出的菌种为新鲜培养物。

yaya19900816 · 发表于 2015-9-18 17:01:09

不太能明白你的意思，首先标准菌株是指从药检所买的冻干粉，是0代，标准菌株要使用需要复活（一般使用TSB,生孢梭菌用硫乙醇酸盐流体培养基），这是1代，1代需要继续复壮（就是取适宜的1代菌液再次增菌），复壮后为2代，2代一般作为标准储备菌株（甘油冷冻保藏），然后2代再次增菌为3代，3代是工作菌株（可以是斜面，也可以是冷冻管），使用时，活化3代工作菌株，增菌液或者是固体培养基培养物即为新鲜培养物，常温2h，2~8度24小时，然后你使用的代数即为3代，3代也可以传4代，活化使用后，使用代数4代。额，我的理解是这样的

lov_new · 发表于 2015-9-18 20:29:32

不太能明白你的意思，首先标准菌株是指从药检所买的冻干粉，是0代，标准菌株要使用需要复活（一般使用TSB, ...[/quote]
为什么不能活化2代作为工作菌株？从2代活化出来的不是新鲜培养物？

yaya19900816 · 发表于 2015-9-19 09:33:53

可以活化2代，但一般来讲2代性状不太稳定，不知道你们做不做菌种特性确认，如果做的话，会发现比如说金葡会出现革兰氏阴性，但第三代就会恢复，全部是阳性，3代比较稳定，所以一般使用3代作为工作菌株。其次是我第一次回答你的是错的，我重新看了下你一开始的问题，发现没有理解你的意思，你说的是药典上说：“接种金葡等等的新鲜培养物至啥啥”，冷冻管是新鲜培养物，标储也是新鲜培养物。所以前面的回答是错的，不好意思

lov_new · 发表于 2015-9-19 21:35:55

yaya19900816 发表于 2015-9-19 09:33
可以活化2代，但一般来讲2代性状不太稳定，不知道你们做不做菌种特性确认，如果做的话，会发现比如说金葡会 ...

你说的2代不稳定，有没有文献或试验数据支持？
如果没有数据支持的话，你可以发表个相关论文了。
我看过最多的说法是1代不稳定。

yaya19900816 · 发表于 2015-9-21 09:17:13

没有查到相关数据，一方面是听药检所老师说的，另一方面确实是我们在做的时候遇到的，1代、2代金葡都是阴性，3代就恢复了

枣泥红薯 · 发表于 2015-11-18 11:21:27

遇到了跟楼主同样的问题，纠结中..............

依土之木 · 发表于 2015-11-28 13:05:56

2代不稳定

binbinbaobao_00 · 发表于 2016-6-14 09:54:42

新制备的工作菌种是新鲜培养物吗？保存一段时间后的工作菌种算是新鲜培养物吗，如果不是，是不是要进行传代一次后才变成新鲜培养物？

ianzeng177 · 发表于 2017-4-2 08:55:14

yaya19900816 发表于 2015-9-19 09:33
可以活化2代，但一般来讲2代性状不太稳定，不知道你们做不做菌种特性确认，如果做的话，会发现比如说金葡会 ...

冷冻管也算新鲜培养物？

豆豆豆豆 · 发表于 2017-4-8 14:42:50

新鲜洗下的斜面也算是新鲜培养物

炒蛋 · 发表于 2017-6-2 11:00:47

lov_new 发表于 2015-9-16 14:31
活化以后怎么记代数？

培养一次，代数增加1.[/quote]

如果我使用的是新鲜培养物，当我用第五代的菌种培养成新鲜培养物时，我的新鲜培养物是不是属于第六代？此时我用新鲜培养物开始我的实验是否已经违背药典的“传代不超过五代”的要求啊？

lov_new · 发表于 2017-6-5 08:36:57

炒蛋发表于 2017-6-2 11:00
培养一次，代数增加1.

如果我使用的是新鲜培养物，当我用第五代的菌种培养成新鲜培养物时，我的 ...[/quote]

应该是的

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