生孢梭菌传代

高连海 · 发表于 2016-7-3 08:10:54

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今天传代时发现用液体石蜡液封的生孢梭菌个别里有少量孢子产生，请问大神，保存时应该时让它产生孢子更利于保存还是不产生孢子更利于保存？如果日常使用产生孢子后会有什么影响？

freeer06 · 发表于 2016-7-3 11:38:11

形成芽孢更有利于保存，也可专门制作成芽孢悬液保存。

戴木木 · 发表于 2016-7-3 19:48:40

生孢梭菌孢子悬液可替代新鲜的菌悬液，孢子悬液可保存在2-8度，在验证过的贮存期内使用。药典是这样说的，所以

高连海 · 发表于 2016-7-3 23:15:57

生孢梭菌孢子悬液可替代新鲜的菌悬液，孢子悬液可保存在2-8度，在验证过的贮存期内使用。药典是这样说的， ...[/quote]
谢谢，有那句话，不过问题是药典里还说了18-24小时，我发现甘油冷冻传代24小时仅有少量孢子，所以有点纠结。

高连海 · 发表于 2016-7-3 23:16:46

形成芽孢更有利于保存，也可专门制作成芽孢悬液保存。[/quote]
谢谢。学习了。

塔塔娜娜 · 发表于 2017-2-21 12:53:00

我是在学习阶段，我这几天想弄一下液体石蜡保存法，这个半固体高层培养基是自己配制的还是直接购买的，或者我在里面弄固体斜面培养基可以吗

高连海 · 发表于 2017-2-21 13:02:32

塔塔娜娜发表于 2017-2-21 12:53
我是在学习阶段，我这几天想弄一下液体石蜡保存法，这个半固体高层培养基是自己配制的还是直接购买的，或者 ...

自己配制就可以，建议穿戴完毕直接石蜡封好。不要分装，直接制备一管管的。

塔塔娜娜 · 发表于 2017-2-21 13:07:30

高连海发表于 2017-2-21 13:02
自己配制就可以，建议穿戴完毕直接石蜡封好。不要分装，直接制备一管管的。

可是我在药典里找不到配制方法啊，大神再指导下

高连海 · 发表于 2017-2-21 13:41:33

塔塔娜娜发表于 2017-2-21 13:07
可是我在药典里找不到配制方法啊，大神再指导下

流乙醇酸盐流体培养基。无菌检查法。

塔塔娜娜 · 发表于 2017-2-21 14:52:35

高连海发表于 2017-2-21 13:41
流乙醇酸盐流体培养基。无菌检查法。

SORRY，没问清楚，是以TSA和SDA为斜面传代的菌，现在用半流动培养基我怎么配制呢

高连海 · 发表于 2017-2-21 16:31:02

塔塔娜娜发表于 2017-2-21 14:52
SORRY，没问清楚，是以TSA和SDA为斜面传代的菌，现在用半流动培养基我怎么配制呢

为啥换成流乙醇？没必要啊。用TSA和SDA就好。

塔塔娜娜 · 发表于 2017-2-21 20:09:05

高连海发表于 2017-2-21 16:31
为啥换成流乙醇？没必要啊。用TSA和SDA就好。

我没想换，我就是想把TSA和SDA都整成半流动的形态，如果没有我就直接用琼脂斜面做，具体实践没做过，所以不了解啊，这是我从网上搜的：
yushanyou12
给你讲讲一般药厂的菌种保藏吧，很省钱的哦，也符合药监局检查时的标准。
药厂一般用到大肠杆菌，金葡菌，黑曲霉，白色念珠球菌，生孢梭菌，枯草芽孢等，我们的目的是保藏一年，标准是买进时是第二代，使用时不超过第五代。
方法：普通冰箱0度一下冷藏。先把买回来的二代菌在相应的培养基中培养分离，观察菌落形态和做革兰氏染色，确定是我们所需要的菌后，再事先准备好半固体琼脂小管，接着用接种环挑取菌落穿刺接种于琼脂的斜面及高层，然后在覆盖上事先准备好的灭过菌并干燥过的液体石蜡，约1CM。就可以冷藏了，有效期一年。
一般是制备12支，然后要用时在取出一支活化后划线接种于琼脂斜面，培养24小时候，冷藏在冰箱里，有效期一月，这个制备4支。这样就能保证每周都有菌用了，使用时是第四代或第五代。
这上面写的是半琼脂小管

高连海 · 发表于 2017-2-22 13:52:26

塔塔娜娜发表于 2017-2-21 20:09
我没想换，我就是想把TSA和SDA都整成半流动的形态，如果没有我就直接用琼脂斜面做，具体实践没做过，所以 ...

甘油冷冻保存就好了。

塔塔娜娜 · 发表于 2017-2-22 14:57:23

高连海发表于 2017-2-22 13:52
甘油冷冻保存就好了。

没有低温保存装置

风停竹声静 · 发表于 2017-12-25 11:08:30

塔塔娜娜发表于 2017-2-21 20:09
我没想换，我就是想把TSA和SDA都整成半流动的形态，如果没有我就直接用琼脂斜面做，具体实践没做过，所以 ...

我见过他们液体石蜡保存的方法，但跟你的方法有区别，有几点疑问，第一在接种环挑取菌落穿刺接种于琼脂的斜面及高层，然后就覆盖上石蜡，请问菌落穿刺接种后是否需要进行培养？如果不培养，接种量是否有要求？因为你后面说每支要再接种4支斜面来保证每周都有菌使用。如果不培养，那液体石蜡保存的即为第3代，在后面每支又分别接种了4支进行培养，即为第4代。那你这一周之内是否就拿这支一直用？不保存冰箱，不再进行增菌培养嘛？

风停竹声静 · 发表于 2017-12-25 11:09:06

塔塔娜娜发表于 2017-2-21 20:09
我没想换，我就是想把TSA和SDA都整成半流动的形态，如果没有我就直接用琼脂斜面做，具体实践没做过，所以 ...

我见过他们液体石蜡保存的方法，但跟你的方法有区别，有几点疑问，第一在接种环挑取菌落穿刺接种于琼脂的斜面及高层，然后就覆盖上石蜡，请问菌落穿刺接种后是否需要进行培养？如果不培养，接种量是否有要求？因为你后面说每支要再接种4支斜面来保证每周都有菌使用。如果不培养，那液体石蜡保存的即为第3代，在后面每支又分别接种了4支进行培养，即为第4代。那你这一周之内是否就拿这支一直用？不保存冰箱，不再进行增菌培养嘛？

lanzhujingling · 发表于 2017-12-25 15:46:50

塔塔娜娜发表于 2017-2-21 20:09
我没想换，我就是想把TSA和SDA都整成半流动的形态，如果没有我就直接用琼脂斜面做，具体实践没做过，所以 ...

只制备4支的话，每周都够用了？我们是每天1支，怎么可能是一周才用1支呢

青梅竹马 · 发表于 2017-12-27 09:19:26

高连海发表于 2017-2-21 13:02
自己配制就可以，建议穿戴完毕直接石蜡封好。不要分装，直接制备一管管的。

是否能具体说一下石蜡封存的方法及使用时如何操作

ASCENT · 发表于 2017-12-29 08:01:49

Thank you guys for sharing the information.

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