HPLC色谱柱问题

jeanee

HPLC菜鸟想请教一下：
请问，HPLC色谱柱使用一段时间柱效下降，可以活化后继续使用吗？
活化后柱效会有所好转吗？
活化的话活化方法哪里有规定吗？
谢谢！

zysx01234

因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1mL／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8mL／min为佳。

当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。

zysx01234

活化其实就是洗柱子，将柱子的一端【出流动相】不接管路，用烧杯或其他接住，用纯溶剂或清洗液在低流速下一般在0.2ml/min走过夜，当然在低速下柱子可以反接。

活化当然对柱子是有一定好处的，把里面的残留清除比较彻底。

zysx01234

如何平衡色谱柱？
1       在拿到一根新的色谱柱时，应首先用合适的溶剂以0.2mL/min的流速将色谱柱平衡过夜，然后将流速缓慢升高到1.0mL/min，冲洗30分钟，以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳状态，这样可以保证色谱柱的使用寿命，并且保证在以后的使用中，获得分析结果的重现性。
2       用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂浓度如果较高，则需要较长的时间来平衡)。色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时，应该按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。

zysx01234

色谱柱的报废：色谱柱使用过程中，发现柱效明显下降，经过重新老化后，柱效没有明显改善，仍然不能符合分析方法要求的，报部门经理或主管批准，该色谱柱做报废处理。

zysx01234

4.8液相色谱柱的使用与维护
   4.8.1      不同的色谱柱所使用的pH值范围有所不同，使用时流动相的pH值应尽可能在规定范围之内，最好使用流动相溶解样品。
   4.8.2      使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。
   4.8.3       流动相使用前必须经脱气和过滤处理。
   4.8.4      使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）。
   4.8.5       避免流动相组成及极性的剧烈变化。
   4.8.6      如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕将柱子冲洗干净，并保存在乙腈或甲醇中。
   4.8.7       压力升高是需要更换预柱的信号。
   4.8.8       使用色谱柱应做好使用记录，以便进行日常维护。
   4.8.9       因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1mL／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8mL／min为佳。
   4.8.10     当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。

pfz2867

zysx01234 发表于 2017-9-13 15:16
4.8液相色谱柱的使用与维护
   4.8.1      不同的色谱柱所使用的pH值范围有所不同，使用时流动相的pH值应 ...

你这文件用的比较溜

zysx01234

pfz2867 发表于 2017-9-13 15:21
你这文件用的比较溜

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jeanee

zysx01234 发表于 2017-9-13 15:06
如何平衡色谱柱？
1       在拿到一根新的色谱柱时，应首先用合适的溶剂以0.2mL/min的流速将色谱柱平衡过 ...

谢谢！
1. 用什么溶剂冲洗，哪里有规定或说明吗？
2. 比如今天测样发现柱效不好，就冲洗了，那之后只要测柱效通过就可以继续使用该柱子是把？
3. 测样前柱子平衡不好会导致什么结果，保留时间漂移？还是峰面积会异常？

zysx01234

jeanee 发表于 2017-9-13 15:30
谢谢！
1. 用什么溶剂冲洗，哪里有规定或说明吗？
2. 比如今天测样发现柱效不好，就冲洗了，那之后只要 ...

反相柱用甲醇或乙腈，正相柱貌似用正己烷吧；
活化之后当然可以继续使用。
柱子使用时必须进行足够长时间的平衡【一般30-60min不等】，之后进行系统适用性测试，再进行进样。

蓝的田

可以活化，但是活化的效果肯定是越来越差的。
活化楼上也说过了，就是洗柱子。反向用梯度甲醇水或乙腈水冲洗，正相一般用异丙醇与正己烷冲洗。

kimpirateyyc

zysx01234 发表于 2017-9-13 15:36
反相柱用甲醇或乙腈，正相柱貌似用正己烷吧；
活化之后当然可以继续使用。
柱子使用时必须进行足够长时 ...

这老师教的好

ASCENT

Thanks for sharing.