薄层色谱系统适应性实验

suzie

请教一下各位同行，在做薄层色谱的系统适应性实验的时候，操作上需要有什么注意的地方么，例如硅胶板的预处理、点样的操作等等。我按药典做一些氨基酸原辅料的“其他氨基酸”项目的时候，需要做薄层色谱的系统适应性实验，要求两个不同的氨基酸标准品需要分开，但是实际上很难做出来两个点分开，有时候只看到一个点。各位有什么经验么，恳请赐教，谢谢

syhorchid

规范并细化实验条件

xqliu

硅胶是否需要活化？

南瓜南瓜

硅胶板需要活化、展开剂充分饱和、点样速度不宜太慢

Drogba19880808

分离度不够主要注意以下几个方面：
硅胶型号是否正确？
硅胶是否用前进行活化？
溶剂配制是否正确
展开缸内是否溶剂饱和？达到气液两相平衡
展开温度是否进行了控制？
点样速度控制如何？分离度不够，可以考虑缩小斑点大小，点样速度加快，高浓度，小体积点样。

z412710502

路过的来了解一下

suzie

Drogba19880808 发表于 2018-1-6 10:15
分离度不够主要注意以下几个方面：
硅胶型号是否正确？
硅胶是否用前进行活化？

硅胶板买的是默克市售的，使用前活化了，溶剂配制确认是没有问题的（但是用的不是色谱纯的试剂，不知道会否有影响）
请教一下怎么确认展开缸溶剂饱和？硅胶板点样前需要预展开么（我是没有预展开的）？
点样我都是用枪头吸样，pia的一下就打到板上了，点完样也没有吹干（我之前看有些帖子说需要用吹风吹干），然后就放到展开缸了

suzie

南瓜南瓜 发表于 2018-1-6 08:54
硅胶板需要活化、展开剂充分饱和、点样速度不宜太慢

你好，关于展开剂充分饱和，我可以做什么去判断是否已经饱和了？

suzie

xqliu 发表于 2018-1-6 08:16
硅胶是否需要活化？

使用前我都会把硅胶板活化的

xqliu

suzie 发表于 2018-1-6 19:17
使用前我都会把硅胶板活化的

那就检查其他的过程细节

Drogba19880808

suzie 发表于 2018-1-6 19:05
硅胶板买的是默克市售的，使用前活化了，溶剂配制确认是没有问题的（但是用的不是色谱纯的试剂，不知道会 ...

1 展开溶剂用分析纯即可，没有必要用色谱级。
2 展开剂需要预展开，展开剂充分混匀，倒入展开缸后，轻微水平震荡，缸口抹上少量凡士林封口。根据经验一般为15分钟到半小时即可饱和。
3 点样的话，我通常使用平头的微量注射器（主要是带体积刻度，也用定量毛细管）一般都ul级别 从1ul到20ul都有，根据溶剂在硅胶的扩散能力不同，多次少量地点样，尽量控制点样斑点在直径为3mm-5mm左右的圆以内。
可以加电吹风（冷风为宜，避免受热出现降解产物）加速溶剂挥发，从而控制点样斑点的大小。

tangyanhong129

学习了。。。。