沉香特征图谱

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各位老师，有没有做过沉香的，请指教，做含量时，正常出峰，做特征图谱时不出峰。
沉香含量测定药典方法：【含量测定】照高效液相色谱法（《中国药典》2015年版通则0512）测定。

7.1　色谱条件与系统适用性试验

  　 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；检测波长为252nm。理论板数按沉香四醇峰计算应不低于6000。

   

时间(分钟） 流动相A ( % ) 流动相B(%)

0〜10       15〜20       85— 80

10 〜19     20— 23      80— 77

19 〜21     23〜33       77— 67

21 〜25        33        67

25〜35         95        5

7.2 对照品溶液的制备

    取沉香四醇对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。

7.3 供试品溶液的制备   

取本品粉末（过三号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇10ml，称定

重量，浸泡0.5小时，超声处理（功率250W，频率40kHz）1小时，放冷，再称定重量，

用乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，即得。

7.4 测定法

   分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

7.5 判定：本品按干燥品计算，含沉香四醇（C17H18O6）不得少于0.10%。

特征图谱药典方法：【特征图谱】 照高效液相色谱法（《中国药典》2015年版通则0512）测定。

5.1  色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm，Diamonsil Cl8 或 Phenomenex luna C18 色谱柱）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.7ml；柱温为30℃；检测波长为252nm。理论板数按沉香四醇峰计算应不低于6000。

时间（分钟） 流动相A ( % ) 流动相B(%)

0〜10         15— 20      85— 80

10 〜19       20— 23      80—77

19 〜21       23— 33      77— 67

21 〜39        33            67

39 〜40      33— 35      67— 65

40 〜50        35             65

50.〜 60       95              5

5.2  参照物溶液的制备

取沉香对照药材约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇10ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz ）1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。另取〔含量测定〕项下的对照品溶液，作为对照品参照物溶液。

5.3  供试品溶液的制备

取〔含量测定〕项下的供试品溶液，即得。

5.4  测定法

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

5.5  判定：供试品特征图谱中应呈现6个特征峰，并应与对照葯材参照物色谱峰中的6个特征峰相对应，其中峰1应与对照品参照物峰保留时间相一致。

做含量测定时，对照、供试都在10分钟左右出峰，一切正常，做特征图谱时，均不出峰。检测波长、流动相均一样，供试品溶液，对照品参照物溶液均一样，前25分钟的梯度也一样，流速从测含量的1ml变为0.7ml，对照与供试都不出峰（按药典上的对照应该在20分钟左右出峰），换柱子也一样。

huhu

我们做过按药典方法没有问题呀