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[其他] 内毒素

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发表于 2019-8-12 10:09:31 | 显示全部楼层 |阅读模式
请教各位大神:碱液去除内毒素的温度及处理时间、处理方式通常是怎么样的呢?
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药徒
发表于 2019-8-12 13:46:01 | 显示全部楼层
细菌内毒素的理化性质:

耐热性:彻底灭活需250高温干烤一小时

水溶性:可溶于水,生产中可用无热原水冲洗以除去热原。

被吸附性:可被活性碳吸附

被酸碱破坏:0.1M HCl或0.1M NaOH 浸泡4小时

被氧化剂破坏:30%双氧水浸泡4小时,可完全破坏

不挥发性



器皿中内毒素的去除:

1 干热法:

适用对象:耐热物品如玻璃制品、金属制品等生产过程中所用的容器

处理方法: 180℃3~ 4h 或 250℃ 30min~ 2h

注意事项:

1.在干烤前,被加热的玻璃器皿上最好不要有水珠,否则可能会使玻璃器皿损坏。

2.烘烤结束后,玻璃器皿不要马上从电热烘箱中拿出,要等温度适度降低之后才可以拿出,以免因温差太大而造成玻璃器皿损坏。

3.器皿上不能含有纸质或塑料制品,以免烘烤时燃烧或熔化。

2 化学降解法:

适用对象:主要用于去除玻璃、塑料和其它高分子材料器皿上的内毒素。

处理方法:常用3~5%双氧水、重铬酸钾硫酸清洁液(重铬酸钾∶硫酸∶水常用配比1∶1∶10 或1∶2∶8 )、0.1M HCl或0.1 M NaOH浸泡去除。一般处理4h以上。

注意事项:佩戴防护用具,防止皮肤直接接触。

溶液中内毒素的去除:

方法 原理 优点 缺点
液相分离法 一些去污剂,如Triton X-114,脱氧胆酸钠能够和内毒素的脂质部分结合,通过液相分离的方法萃取内毒素从而使后者有效地去除。 对内毒素的去除率高,且不影响有效成份的活性。该法简单高效、价格低廉、适合大规模应用,在我们日常的蛋白纯化中较为常用。 去内毒素后的样品会有微量去污剂的残留。
离子交换法 当溶液pH合适时,内毒素带有负电荷。因此内毒素与阴离子交换介质Q或DEAE Purose 6 Fast Flow有较强结合。柱上的内毒素用高盐缓冲液或NaOH去除。 成本低,吸附容量大 适合于溶液中存在其它带负电荷物质的情况
亲和纯化法 将适当的配基固载于色谱基质上合成出亲和介质,使它特异性结合内毒素。千纯生物的Purose Endotoxin-Removal亲和填料可以特异性吸附内毒素。 高效能、高选择性 相对成本较高。
疏水层析法 毒素的脂肪A 部份有很强的疏水性, 但在高盐下会凝集, 无法挂上疏水层析柱。因此可选择能结合目标蛋白的疏水介质去除内毒素 适用于高盐浓度的样品 相对成本较高
分子筛法 子筛是利用凝胶的网状结构,根据分子大小进行分离的一种方法。由于蛋白质和内毒素的分子量有较大差别,因此利用分子筛可以有效去除内毒素。 去除效果明显 每次处理量小,处理时间较长
超滤法 由于内毒素具有较大的相对分子质量,因此可选用超滤膜去除溶液中的内毒素。 操作简单,处理量大 操作过程中的压力较高。 不适合含有较大相对分子质量成份的样品。因为在除去热原的同时会阻留或吸附样品中的有效成份,使产品收率大受影响。


以上供参考,收集的资料
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药徒
发表于 2019-8-12 13:39:16 | 显示全部楼层
可以考虑酸碱破坏或者强氧化剂,具体的没有可以给您参考的实例,不管是哪种方法都需要经过验证才可以使用,抱歉
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药徒
发表于 2019-8-12 10:48:54 | 显示全部楼层
我们这边一般用1%的NaOH浸泡10分钟 清洁验证没有问题~
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 楼主| 发表于 2019-8-12 10:55:40 | 显示全部楼层
pkdongxun 发表于 2019-8-12 10:48
我们这边一般用1%的NaOH浸泡10分钟 清洁验证没有问题~

温度呢   60℃吗
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药徒
发表于 2019-8-12 11:00:22 | 显示全部楼层
250℃干热灭菌1h
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药徒
发表于 2019-8-12 11:04:50 | 显示全部楼层
我怎么看不懂,你们到底在说灭菌还是除内毒素??
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药徒
发表于 2019-8-12 11:05:18 | 显示全部楼层

我这边是常温 不过这东西还是要自己做验证 也和你们内毒素初始的含量有关
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 楼主| 发表于 2019-8-12 11:45:28 | 显示全部楼层
pkdongxun 发表于 2019-8-12 11:05
我这边是常温 不过这东西还是要自己做验证 也和你们内毒素初始的含量有关

好的  谢谢啦
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 楼主| 发表于 2019-8-12 11:45:56 | 显示全部楼层
a1234567890 发表于 2019-8-12 11:04
我怎么看不懂,你们到底在说灭菌还是除内毒素??

除内毒素呀
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 楼主| 发表于 2019-8-12 11:46:37 | 显示全部楼层

不能耐受高温呢
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 楼主| 发表于 2019-8-12 14:16:49 | 显示全部楼层
zx-victoria 发表于 2019-8-12 13:46
细菌内毒素的理化性质:

耐热性:彻底灭活需250高温干烤一小时

谢谢         谢谢
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发表于 7 天前 来自手机 | 显示全部楼层
学习了,谢谢了
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