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脉冲场凝胶电泳实验流程

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药徒
发表于 2020-6-2 17:30:00 | 显示全部楼层 |阅读模式

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脉冲场凝胶电泳实验流程
一、 准备样品
1. 琼脂糖包埋的样品
常用的DNA提取方法不能得到完整的大分子量DNA。大分子量DNA很脆弱,在制备过程中容易因移液等操作造成机械剪切。将完整细胞包埋入琼脂糖后再进行裂解,去除蛋白的操作,可防止大分子量DNA的断裂。琼脂糖块包埋的DNA可以避免被机械剪切,并且是一种简单的操作方法。处理过的包埋有DNA的琼脂糖块可以直接放入琼脂糖凝胶的点样孔。
在将细胞包埋入琼脂糖之前要先确定细胞浓度,尽管吸光度很常用,但是并不可靠。单位吸光度对应的细胞浓度会因菌株不同或培养基不同而有差异。这会影响琼脂糖块中DNA的含量,导致上样量过大或不足。不论细菌、真菌还是哺乳动物细胞,使用血球计数板均可得到准确和高重复性的细胞浓度。
Bio-Rad提供一次性的样品模具(货号:170-3713)。每个模具可制备50个10 x 5 x 1.5 mm的琼脂糖胶块。样品制备过程中的酶可以快速有效的扩散进入胶块,用Bio-Rad标准梳子制胶,胶块不需要修剪就可直接放入点样孔。
2. 液体样品
小于200kb的DNA片断可以不用琼脂糖包埋,可直接以液体形式加入点样孔。当操作的DNA大于50kb时,必须用大开口的吸头。如果只电泳液体样品,使用厚度0.75 mm的梳子可以获得更锐利的条带和更高的分辨率。
3. 制备琼脂糖包埋的哺乳动物DNA
该方法中用到的缓冲液,酶和琼脂糖均包含于试剂盒CHEF Mammalian Genomic DNA Plug Kit。。。。。。。

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脉冲场凝胶电泳试验流程.pdf

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药生
发表于 2020-6-3 08:00:37 来自手机 | 显示全部楼层
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药徒
发表于 2021-12-18 14:07:41 | 显示全部楼层
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