无菌检测（直接接种法）

后春天的诗unv

无菌检测（直接接种法），用的培养基体积是15mL，样品4ml/支，那我接种量到底是按不大于培养基体积的10%，即1.5mL，还是按检验用量20%即2mL进行接种？

思恋

“除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10 % ,同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml, 胰酪大豆胨液体培养基每管装量不少于10ml。”
先回答你的问题，上面这是原文，写得很清楚了，你的供试品不大于培养基体积的10%就可以，比如胰酪大豆胨液体培养基，你的供试品体积换算下来就应该小于等于1ml，如果超了，就得增加胰酪大豆胨液体培养基的体积，使之达到要求。
最后给个建议，直接接种法“直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试品”，你这个样品是4ml/支，看你描述应该是液体，液体就得按薄膜过滤法来做，而且要做方法学验证。

后春天的诗unv

思恋 发表于 2023-4-24 09:28
“除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10 % ,同时，硫乙醇酸 ...

我们的无菌隔离器还没验证，所以暂时在生物安全柜中进行直接接种，直接接种用的是商购培养基（15mL）， 我的样品如果是4mL，那我是取培养基体积的10%还是样品体积的50%，取50%的时候新增加一管培养量吗？另外再请教一个问题，体积＜1mL的样品取20瓶进行直接接种，是把20瓶混匀后接种还是每瓶接种1支培养基？

思恋

后春天的诗unv 发表于 2023-4-24 10:21
我们的无菌隔离器还没验证，所以暂时在生物安全柜中进行直接接种，直接接种用的是商购培养基（15mL），  ...

那就直接回答问题吧：
1.样品混匀，取1ml接种到10ml培养基中；
2.两种方法都可以，看你自己怎么规定，一瓶一支肯定更好，但是会造成浪费，20瓶一支节约，但是出现不合格时，你没法分析，只能加严再测一次。所以建议根据样品的性质，重新定义一下无菌检查需要的用量。

后春天的诗unv

思恋 发表于 2023-4-24 10:39
那就直接回答问题吧：
1.样品混匀，取1ml接种到10ml培养基中；
2.两种方法都可以，看你自己怎么规定， ...

懂了，谢谢解惑

Nicoleamb

思恋 发表于 2023-4-24 09:28
“除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10 % ,同时，硫乙醇酸 ...

答主的意思是在无菌检查方法中能用薄膜过滤法的就要用吗？我们的产品是带线手术针，一直用直接接触法。每个样品放多少培养液适合呢？

思恋

Nicoleamb 发表于 2023-5-6 15:33
答主的意思是在无菌检查方法中能用薄膜过滤法的就要用吗？我们的产品是带线手术针，一直用直接接触法。每 ...

能用薄膜过滤尽量薄膜过滤，如果直接接种法你们已经验证了，那就按验证的来，一般的话，就按药典最低量10ml和15ml就够了

Nicoleamb

思恋 发表于 2023-5-6 15:46
能用薄膜过滤尽量薄膜过滤，如果直接接种法你们已经验证了，那就按验证的来，一般的话，就按药典最低量10 ...

谢谢回复，我刚刚还想起来一个问题，就是用什么容器培养。原则上是用大试管，但是样品多的话我们想用那种50ml的蓝盖离心管。我看到别的帖子上说直接用采样袋培养会有假阴性。那同理，用这种离心管培养也会吗？如果拧松半圈是不是可行呢

思恋

Nicoleamb 发表于 2023-5-6 16:06
谢谢回复，我刚刚还想起来一个问题，就是用什么容器培养。原则上是用大试管，但是样品多的话我们想用那种 ...

没验证过的东西，你就没法去使用，离心管拧松半圈还会不会导致假阴性，同时，拧半圈是不是会导致污染，导致假阳性，没法去确定。而且试管比离心管便宜那么多，为啥不用试管呢。当然，你要非要用离心管，可以在无菌检查法的适用性验证时候加进去，用阳性对照、阴性对照验证之后，看看是拧半圈还是不拧也能达到要求。