注射液细菌内毒素

godglow

请问各位大佬，现在限度L是0.25EU/ml
,让我做药品的溶剂（无水乙醇）的细菌内毒素，这样算稀释倍数不就是1吗，问题2倍－15倍又有干扰，到底该怎么做啊。

yc20160802

https://www.wakopyrostar.com/blog/kit-lal/post/strategies-for-measuring-endotoxin-in-difficult-samples/
测量困难样品中内毒素的策略 2022 年 10 月 25 日
肠外治疗产品的内毒素污染可导致严重后果，包括发烧、败血症和感染性休克。因此，内毒素检测已成为注射药品和医疗器械生产和质量控制的常规和关键组成部分。
鲎阿米巴细胞裂解物 (LAL) 测定是目前最完善的内毒素评估测试。1它依赖于将鲎的变形细胞提取物与检查内毒素污染的样品一起孵育。如果分析的样品中存在内毒素，则会形成凝块。最传统的鲎试剂测定技术是定性凝胶凝块测定。随后，开发了 LAL 测定的定量版本，包括显色法和比浊法 LAL 测定。
LAL 测定的准确性和可靠性已得到证实。然而，与测试产品、分析混合物成分、环境甚至容器相关的各种因素可能会导致测试挑战和误导性结果，包括样品干扰或内毒素掩蔽。2-4可能干扰鲎试剂测定正常性能的因素包括化学抑制剂（如乙二胺四乙酸、EDTA）；变性剂（例如浓酸、浓碱、无机盐或有机溶剂）；基础醇分子；pH 值超出最佳范围；内毒素掩蔽（通过赋形剂、表面活性剂、螯合剂或 N-二甲胺氧化物等物质）；或内毒素被容器表面吸收。1对于医疗器械，抗凝涂层、重金属含量或颗粒物的存在可能会干扰测试结果。2对于使用显色法评估的产品，与鲎试剂接触时会变成特定颜色的检测混合物成分也可能会干扰测试结果。1对于用比浊法检测的样品，浑浊或悬浮产物也可能导致样品干扰。
人们已经制定了各种策略来减轻引起样品干扰或内毒素掩蔽的因素的影响：
1. 适当的样品稀释——如果鲎试剂测定中没有干扰或增强活性，建议筛选未稀释的产品。然而，如果产品成分干扰鲎试剂测定，则应稀释产品以克服干扰或增强。建议确定可中和干扰效应但仍可进行内毒素测定的最低产品稀释度。
2. 消化、添加缓冲液、过滤或离心是减轻医疗器械测试干扰的其他潜在治疗方法。其实施应基于对干扰因素的仔细评估和测试条件的验证。
3.维持最佳 pH 范围– 鲎试剂测定的最佳 pH 范围为 6.0–8.0 范围，测试条件应维持在此范围内，以确保结果一致。
4.确保样品均匀性——悬浮样品可能会导致干扰问题。因此，应努力确保样品的均匀性。在这种情况下，不建议合并来自制造过程不同阶段的样品，因为它们的同质性可能难以确保。
5.调整合并样品的最大有效稀释度 (MVD) – 在某些情况下，小体积单位的成品药物可能会合并到复合样品中进行鲎试剂分析。在这种情况下，应将单个样本的计算 MVD 除以合并样本总数，将 MVD 调整为成比例的较低值。
6.使用在 LAL 测定中充分表征的试剂盒和样品容器– 由于 LAL 测定混合物和样品容器的成分也可能对测试结果产生负面影响，因此应仅使用4 个充分表征的测试试剂盒和样品容器。
参考文献
Wheeler, A. Comparing endotoxin detection methods. Pharmaceutical Technology 2017;41:58–62.
FDA. Guidance for industry: pyrogen and endotoxins testing: questions and answers. June 2012.
Reich J, Lang P, Grallert H, Motschmann H. Masking of endotoxin in surfactant samples: Effects on Limulus-based detection systems. Biologicals. 2016;44(5):417-22. doi: 10.1016/j.biologicals.2016.04.012.
Bech Ørving R, Carpenter B, Roth S, Reich J, Kallipolitis B, Sonne-Hansen J. Bacterial Endotoxin Testing-Fast Endotoxin Masking Kinetics in the Presence of Lauryldimethylamine Oxide. Microorganisms. 2020;8(11):1728. doi: 10.3390/microorganisms8111728.

sctealive

稀释倍数要根据你的限度以及使用的鲎试剂灵敏度来计算