样品微生物适用性检查回收率

努力魔方

请问有老师遇到过样品对孢子有抑制作用的吗？怎么消除影响？最近做的一个样品枯草和黑曲试验组都不长，想请教一下是什么原因

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世间始终你好

你说的情况在微生物限度检查、生物指示剂验证等过程中是比较常见的，即样品本身对孢子（如枯草芽孢杆菌、黑曲霉）有抑制作用，导致试验组不生长，这种情况称为：抑菌（抑孢）干扰。

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一、常见的原因分析：1. 样品本身有抗菌或抗真菌成分：

• 比如含有防腐剂、表面活性剂、有机酸、强氧化性成分或高浓度盐分、醇类等。
  
• 一些原料药、中药提取物、植物提取液、涂布材料、辅料也常见有天然抑菌活性。
  
  

2. 样品浓度太高，未充分稀释或中和

• 原液或高浓度供试液本身就不利于菌生长。
  
• 未经稀释可能直接杀灭或抑制菌孢子萌发。
  
  

3. pH过低或过高

• 枯草芽孢杆菌和黑曲霉在 pH 5.0~8.0 范围内生长最佳。
  
• 样品 pH 太偏（如过酸、过碱）也可能造成不生长。
  
  

4. 样品对培养基造成干扰

• 某些样品中的成分可能影响培养基凝固性或透明度，甚至影响营养成分可利用性。
  
  

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二、如何应对样品对孢子的抑制作用？✅ 方法1：增加稀释倍数（最常用）

• 逐级稀释（比如10倍、100倍、1000倍）样品后重新进行试验，看是否恢复生长。
  
• 如果稀释到一定倍数后生长恢复，可证明为样品干扰。
  
  

✅ 方法2：中和法

• 对于确定含有特定抑菌成分（如酒精、过氧化物、防腐剂等）的样品，使用化学中和剂：
  
  
  • 双氧水 → 加入过氧化氢酶
    
  • 苯扎氯铵 → 加入卵磷脂+吐温80
    
  • 有机酸类 → pH调节
    
  • 醇类 → 稀释法或干燥挥发
    
    

✅ 方法3：膜过滤法

• 特别适合液体样品。
  
• 把供试液过滤后用中和液冲洗膜，将菌过滤下来再转培养基培养。
  
• 有效去除可溶性抑菌成分。
  
  

✅ 方法4：验证中和有效性

• 按药典“中和法/膜过滤法验证”进行，加入标准菌株模拟试验，以确认中和/稀释措施有效。
  
  

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三、你当前遇到的问题：

“枯草和黑曲试验组都不长” → 说明样品可能广谱抑菌，对细菌和真菌都有抑制。

建议你操作如下：

• 设阳性对照（标准菌+培养基，不加样品）确认菌株本身无问题。
  
• 设阴性对照（样品+培养基，不加菌）确认是否污染。
  
• 设稀释试验组，比如1:10、1:100、1:1000，加入同样量菌，观察是否能生长。
  
• 如果是膜过滤法，确认是否使用了中和液冲洗。
  
• 检查样品 pH（是否极端）、浊度、成分是否已知有抗菌性。
  
  

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四、结论简要版问题可能原因应对措施
试验组枯草、黑曲不长样品有抑菌作用（如防腐剂、醇类）增加稀释倍数
pH不适调整至pH 6-8
培养基或菌株问题设置阳性对照确认
样品未中和使用中和剂/膜过滤法冲洗

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Rabbi

稀释液里面加吐温80 ，从含吐温80量0.1%开始梯度摸索

生鱼汤

能说一下是什么种类的样品，不然不好找中和剂活着解决方法

努力魔方

生鱼汤 发表于 2025-07-18 10:57
能说一下是什么种类的样品，不然不好找中和剂活着解决方法

是一个化学原料药，具体结构我们也不清楚

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努力魔方

世间始终你好 发表于 2025-07-18 10:30
你说的情况在微生物限度检查、生物指示剂验证等过程中是比较常见的，即样品本身对孢子（如枯草芽孢杆菌、黑曲霉）有抑制作用，导致试验组不生长，这种情况称为：抑菌（抑孢）干扰。
一、常见的原因分析：1. 样品本身有抗菌或抗真菌成分：比如含有防腐剂、表面活性剂、有机酸、强氧化性成分或高浓度盐分、醇类等。
一些原料药、中药提取物、植物提取液、涂布材料、辅料也常见有天然抑菌活性。

2. 样品浓度太高，未充分稀释或中和原液或高浓度供试液本身就不利于菌生长。
未经稀释可能直接杀灭或抑制菌孢子萌发。

3. pH过低或过高枯草芽孢杆菌和黑曲霉在 pH 5.0~8.0 范围内生长最佳。
样品 pH 太偏（如过酸、过碱）也可能造成不生长。

4. 样品对培养基造成干扰某些样品中的成分可能影响培养基凝固性或透明度，甚至影响营养成分可利用性。

二、如何应对样品对孢子的抑制作用？✅ 方法1：增加稀释倍数（最常用）逐级稀释（比如10倍、100倍、1000倍）样品后重新进行试验，看是否恢复生长。
如果稀释到一定倍数后生长恢复，可证明为样品干扰。

✅ 方法2：中和法对于确定含有特定抑菌成分（如酒精、过氧化物、防腐剂等）的样品，使用化学中和剂：

双氧水 → 加入过氧化氢酶
苯扎氯铵 → 加入卵磷脂+吐温80
有机酸类 → pH调节
醇类 → 稀释法或干燥挥发

✅ 方法3：膜过滤法特别适合液体样品。
把供试液过滤后用中和液冲洗膜，将菌过滤下来再转培养基培养。
有效去除可溶性抑菌成分。

✅ 方法4：验证中和有效性按药典“中和法/膜过滤法验证”进行，加入标准菌株模拟试验，以确认中和/稀释措施有效。

三、你当前遇到的问题：“枯草和黑曲试验组都不长” → 说明样品可能广谱抑菌，对细菌和真菌都有抑制。
建议你操作如下：
设阳性对照（标准菌+培养基，不加样品）确认菌株本身无问题。
设阴性对照（样品+培养基，不加菌）确认是否污染。
设稀释试验组，比如1:10、1:100、1:1000，加入同样量菌，观察是否能生长。
如果是膜过滤法，确认是否使用了中和液冲洗。
检查样品 pH（是否极端）、浊度、成分是否已知有抗菌性。

四、结论简要版问题可能原因应对措施
试验组枯草、黑曲不长样品有抑菌作用（如防腐剂、醇类）增加稀释倍数
pH不适调整至pH 6-8
培养基或菌株问题设置阳性对照确认
样品未中和使用中和剂/膜过滤法冲洗

感谢

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努力魔方

Rabbi 发表于 2025-07-18 10:42
稀释液里面加吐温80 ，从含吐温80量0.1%开始梯度摸索

嗯，只能试试看了

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wx18368600093

先确认孢子活性（阳性对照）；
稀释样品或调整pH/渗透压；
必要时分析样品成分，针对性消除干扰