复方布他磷注射液中维生素B12稳定性问题

sgbpr0thpb

求助求助各位大佬们！！！我们制备的复方布他磷注射液，维B12的含量是5mg/100ml，检测0天维生素B12的含量只有80%，目前知道的是维生素B12对光很敏感，不知道是在配置过程中降解，还是因为维B12用量极微，在称量的时候不精准（采用的先给维B12配成5mg/2ml的浓溶液，再加入到含有正丁醇和布他磷溶液中），求助各位大神其中需要注意的事项或者有没有好点解决方法，感谢感谢！！！

羽遥

1. 精准度排查（先排除操作误差）  
   - 称量：用十万分之一天平（校准后），避光环境（湿度40%-60%）称取维B12；  
   - 浓配：棕色容量瓶超声助溶，定容后摇匀，转移用棕色移液管（润洗2-3次）；  
   - 核对：配完浓溶液后立即测浓度，确认是否合格（排除称量/转移损失）。

2. 全流程防光+防降解
   - 避光：称量、配制、转移均用棕色器具，避光橱内操作，避免日光/日光灯直射；  
   - 配伍：单独测维B12浓溶液稳定性，再分别与布他磷、正丁醇混合测，排查配伍反应；  
   - pH/氧：调节注射液pH至5.0-6.0（维B12稳定区间），配制时通氮气驱氧，减少氧化。

3. 验证定位（空白+回收率试验）
   - 空白回收率：维B12标准品加空白溶剂（无布他磷/正丁醇），测0天含量，排查辅料影响；  
   - 操作回收率：模拟全工艺加标准品，测含量，排查操作环节损失。

世间始终你好

好——我把可能原因、优先排查的实验和立刻能落地的防护/工艺改进措施都列清楚了，按你现在描述的流程（先配成 5 mg/2 mL 的浓溶液再加入含正丁醇＋布他磷的溶液）来给出可操作的检查表和解释，方便你逐条执行并定位是“配制/称量问题”还是“光/化学降解”导致的 20% 损失。

---

可能的原因（优先级从高到低）

• 光引起的光化学降解（最常见） —— B12（cobalamin）在溶液中对光高度敏感，尤其在可见光/UV 下会发生转化（如 cyanocobalamin → hydroxocobalamin 等），并且在某些助剂（抗氧化剂、其他维生素）存在时可被加速。
  
• 称量/配制精度问题（微量称量误差） —— 你先配 5 mg/2 mL 的浓溶液，如果称的 B12 质量太小、或操作中残留、附着在称量纸/容器上，会引入较大相对误差（尤其是目视加样或用普通分析天平称很小质量时）。
  
• 吸附/黏附损失（容器表面） —— B12、有些维生素会吸附到玻璃或某些塑料容器、滤器或注射器内壁，导致回收率下降。近期研究也报告在某些玻璃/HPLC 小瓶上有显著吸附损失。
  
• 溶剂/赋形体系影响（溶解度、分配、化学稳定性） —— 你配成浓溶液再加入含正丁醇（n-butanol）的体系：有文献和专利显示一定类型的丁醇有时可用于稳定 B12（专利报道用 butanol 稳定 B12），但具体效果依配方、pH、含水量而异。若溶媒/辅料促使 B12 转相或沉淀，也会导致检测下来的有效含量下降。
  
• 分析前处理/测定方法回收率不到位 —— 抽样、稀释、过滤（尤其是用结合吸附风险的滤膜）、光暴露、或标准曲线问题，都可能造成测定偏低。文献里也有报告 B12 与其他维生素/抗氧化剂共同存在会改变测定结果（光/化学相互作用）。
  
  

---

立刻可以做的区分性实验（按顺序做，便于定位原因）每项都要记录时间点（0 min）和样品处理环境（光/暗、室温/冰上）。

• 称量/配制回收对照（判断是否为称量误差）
  
  
  • 用同一批 B12 分两份处理：A）直接称 5 mg（或尽量称更大量如 50 mg，然后稀释到相同终浓度），B）按你现有流程称少量配 5 mg/2 mL。
    
  • 在完全避光（暗室或用铝箔/琥珀瓶）下立即稀释并做测定。
    
  • 若 A、B 两组初始测定结果差别显著，说明称量/转移/稀释操作存在问题（用量太小、残留在容器壁等）。
    
    
• 光暴露敏感性对照（判断是否在配制/转移时光降解）
  
  
  • 同样配两组：一组全程在暗处处理（暗室或红光）、用琥珀瓶保存并用铝箔包裹；另一组按常规明亮环境操作。两组在“配制完成后立即”取样测定。
    
  • 如果明亮组明显低于暗组，说明光降解在配制/转移阶段发生。文献显示光照下即有快速分解/转化。
    
    
• 加入最终基质后即时回收（判断配方/溶剂相互作用）
  
  
  • 把已知浓度的 B12 标准（在暗处制备的）分别加入：a) 仅含有正丁醇的溶液，b) 含布他磷的溶液，c) 含两者的最终配方。
    
  • 立刻测定（或短时 0~10 min）回收率。若加入某个组分后即时回收降低，说明化学/物理相互作用或溶解/分配变化。专利/文献提示 butanol 可稳定，但具体要验证你配方条件。
    
    
• 吸附损失检测
  
  
  • 在相同浓度下，把样品分别置入不同容器（硅化/低吸附玻璃、普通硼硅玻璃、常用塑料注射器、琥珀小瓶），短时静置并测定回收。若某材料回收率低，说明吸附问题明显（HPLC 小瓶尤其可能）。
    
    
• 分析方法回收与稀释线性
  
  
  • 做空基质加标回收（spike-recovery）：把已知量 B12 加入最终制剂基质（在暗），走完整个样品前处理流程（包括过滤、稀释），测定回收率。若回收 < 90%，是分析/前处理问题（滤膜吸附、样品降解、标样配制错误等）。
    
  • 同时做标准曲线的线性和低量点精密度验证（你用的定量法是否在该低含量范围准确？）
    
    

---

立刻可实施的工程/操作改进（优先级与细节）

• 全流程避光（最重要、低成本）
  
  
  • 配制区、称量台尽量改为低照度（暗室或红光）、操作时使用遮光罩或铝箔包裹容器。制剂转移、稀释、进样全部使用琥珀／棕色玻璃瓶或铝箔包裹的容器，并尽快密封。文献明确指出光是主要诱因。
    
    
• 增加称量精度 / 改用大批量中间液
  
  
  • 避免称极小量（例如 < 5 mg）直接配制。推荐：一次称大量（例如 50–500 mg，按实际可行），用容量瓶配成母液，再用移液管取出所需量稀释，这样降低称量相对误差并减少“残留/吸附”影响。
    
  • 使用合格校准的分析天平或微量天平；用带盖的称量船，尽量减少转移次数。
    
    
• 缩短光暴露时间与操作步骤
  
  
  • 将 B12 从包装到加入最终容器的暴露时间降到最短（秒—分钟级而不是十几分钟）。在必要时在冰上操作以减缓热促变。
    
    
• 使用低吸附器材 / 预处理孔径/滤膜
  
  
  • 优先使用低吸附（silanized）玻璃或经封闭处理的容器；避免使用已知吸附严重的小体积 HPLC 瓶。滤膜选型要验证（做空白回收试验），如 PVDF、PTFE 等材质的吸附差异大，需验证后选用。文献报告在某些硼硅玻璃上吸附严重。
    
    
• 检查并控制 pH / 还原剂 /氧化环境
  
  
  • B12 的光化学转化与溶液 pH、存在的还原剂（如抗坏血酸/ascorbic acid）有关：有些还原剂会加速向不溶或被氧化的产物方向转化。检查配方中是否有抗氧化剂、维生素类或还原性辅料，并做相互作用评估。
    
    
• 若必要，考虑用稳定化策略
  
  
  • 文献/专利提到某类 butanol（和某些醇类）能在一定条件下稳定 B12（专利上用 butanol 类作为稳定剂）。但这是条件依赖的，先用小规模实验验证（如上述“加入最终基质后即时回收”试验）再决定是否作为工艺改动采用。不要直接加入未经验证的添加剂到上市配方。
    
    

---

推荐的短期 SOP 修改（可直接下发操作手册）

• 称量：若必须称少量，使用微量天平并预先校准；优先采用“称大体积母液 → 定量移液”策略。
  
• 光学防护：所有含 B12 的操作（称量、溶解、稀释、上样）在暗室或遮光条件下进行；成品/样品用琥珀瓶并铝箔包覆。
  
• 样品采集/送检：采样时加贴“避光”标识，运输样品用铝箔包裹并冷藏（如有需要）。
  
• 分析：样品前处理全程避光，使用经验证的滤膜和容器，并在方法验证中加入“吸附回收”项目（spike recovery）。
  
• 记录：记录每次配制的光照暴露时长、称量批号、容器材质、温度及 pH（如测得）。
  
  

---

如果你现在就想先快速判断“是配制就丢失还是后期降解”，做这个最简单的两步对照（可在半天内出结论）

• 在暗处配制并立即测定（0 天）：若回收 ~100%，说明测定法没问题且配制后立刻并未丢失，问题更可能是配后暴光或储存稳定性。
  
• 在明亮处按你原流程配制并立即测定（0 天）：若回收显著低于暗处，说明配制/转移时的光暴露已经导致损失（需要马上把配制流程改为避光）。
  
  

---

关键参考（用于你向法规/QA/同事说明的载体）

• Juzeniene A. 等 — Photodegradation of cobalamins in aqueous solutions（综述，指出溶液中 cobalamin 对光敏感）。
  
• WHO/EMRO / Baqai J. 等 — Photodegradation of cyanocobalamin（光降解动力学说明、与抗氧化剂相互作用）。
  
• 专利与文献指出 butanol 类 在某些条件下可用于稳定 B12（需验证）。
  
• 关于容器吸附/前处理损失的近期研究（提醒注意硼硅玻璃 HPLC 瓶等吸附问题）。
  
  

---

？