丙二醇（供注射用）细菌内毒素检查怎么做？

蕾997c8916

各位大神，请教下丙二醇（供注射用）细菌内毒素检查怎么做？药典的标准是＜0.012EU/mg，目前看到2种说法
①不能用凝胶法，用光度法做
②可以用凝胶法，样品最小稀释倍数C=λ/L，λ=0.25EU/ml，L=0.012EU/mg，C=20.83mg/ml，称取20.83mg丙二醇，加1ml检查用水溶解，检测。这样对吗？我的疑问是：浓度的计算不是溶质/总体积吗？为什么用溶质/溶剂？丙二醇自身的体积不算啦？
求教到底应该怎么做啊？

羽遥

计算：假设我们要配制10 mL溶液。
所需样品的质量 = 浓度 × 体积 = 20.83 mg/mL × 10 mL = 208.3 mg

操作：
精确称取丙二醇（供注射用）208.3 mg。
将其置于10 mL容量瓶中。
用细菌内毒素检查用水稀释至刻度线，摇匀。
此时得到的溶液浓度为 20.83 mg/mL，完全满足要求。

不见猫骨头

好问题，结构化学你了解多少，在结构化学中1杯酒精+1杯水≠2杯酒

羽遥

蕾997c8916

羽遥 发表于 2025-9-2 14:20
计算：假设我们要配制10 mL溶液。
所需样品的质量 = 浓度 × 体积 = 20.83 mg/mL × 10 mL = 208.3 mg

就是说还是要定容到10ml，而不是加10ml的检查用水，感谢

世间始终你好

你这个问题抓得很准：关键在于限度换算 + MVD（最大有效稀释倍数），以及**方法适用性（干扰）**两件事。
结论先说

• 丙二醇（供注射用）的内毒素限度给成每 mg 0.012 EU是没问题的（L = 0.012 EU/mg）。
  
• 能不能用凝胶法？可以用，但前提是方法适用性通过。丙二醇对凝胶法常见“抑制”现象，很多实验室最终会改用**光度法（动力学浊度/显色）**并做一定稀释来消除干扰。
  
• 你给的“C = λ / L = 20.83 mg/mL”的算式思路对（它找的是让 MVD = 1 的那个配制浓度），但不是规定必须这样配，而是一个“方便配制、方便判定”的参考点。真正合不合格仍取决于方法适用性试验是否通过。
  
  

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正确的计算与判定逻辑（通用公式）

• 把“每 mg 的限度 L”换算成你所配样品液的“每 mL 限度”：
  
  

EL(EU/mL)  =  L  (EU/mg)×S  (mg/mL)EL_{\text{(EU/mL)}} \;=\; L \;(\text{EU/mg}) \times S \;(\text{mg/mL})其中 SS 是你配的样液浓度（单位 mg/mL）。

• 计算最大有效稀释倍数（MVD）：
  
  

MVD  =  ELλ  =  L×Sλ\text{MVD} \;=\; \frac{EL}{\lambda} \;=\; \frac{L \times S}{\lambda}λ\lambda 是你所用灵敏度标示的 LAL 试剂（如 0.25 EU/mL、0.125 EU/mL 等）。

解释你算式的意义：当你取 S=λ/LS = \lambda/L（即 0.25 / 0.012 = 20.83 mg/mL）时，
EL=0.012×20.83≈0.25 EU/mL=λ⇒MVD=1EL = 0.012 \times 20.83 \approx 0.25\ \text{EU/mL} = \lambda \Rightarrow \text{MVD} = 1也就是说，在这个浓度下你最多只能做“1 倍”（不稀释）来检测。这就是这个配比的“巧妙之处”。

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“浓度到底怎么算”的疑问药典里 BET 配液的常规约定是：把样品称取 x mg，加入 BET 用水使总体积为 1 mL（或加入 1 mL 水溶解/稀释），并将浓度按“mg/mL”来算。
这里采用的是质量/加入的溶剂体积的工程近似，而不去校正溶质自身所占体积（尤其是固体或少量液体样品）。
原因有二：

• 实务中样液浓度的微小体积变化（例如 1 mL 水里再溶了 20 mg 的体积贡献）对最终EL 与 MVD的影响很小；
  
• 这样定义便于配制和复现，且通常更保守（稍微高估了 S，有利于“不过稀”）。
  
  

如果你特别较真，也可以“定容至 1.00 mL”的体积法配制；但 BET 的判定不会因为这点体积差异而改变结论（远小于方法学允许的误差与内毒素本身的不确定度）。

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实操建议（按你给的数字举例）

• 限度：L=0.012 EU/mgL = 0.012\ \text{EU/mg}
  
• 试剂灵敏度：λ=0.25 EU/mL\lambda = 0.25\ \text{EU/mL}
  
  

方案 A（你给的配比）

• 配制：称取20.8 mg 丙二醇，加 BET 水定容/加入到 1.00 mL（约 20.8 mg/mL）。
  
• 计算：
  EL=0.012×20.8≈0.25 EU/mLEL = 0.012 \times 20.8 \approx 0.25\ \text{EU/mL}
  MVD=EL/λ≈1\text{MVD} = EL/\lambda \approx 1。
  ⇒ 你**最多只能做不稀释（1×）**来上机/上凝胶。
  
• 方法适用性（关键）：做“加标回收/抑增试验”（光度法）或“加标阳性对照”（凝胶法）：
  
  
  • 凝胶法：在λ 水平加标的阳性对照应能成凝；样品加标对照亦应阳性；样品空白应阴性。
    
  • 光度法：在 0.5–2λ 范围加标，回收 50%–200%；若不通过，逐步加大稀释倍数，但不得超过 MVD（本方案 MVD=1，没有回旋空间）。
    
    
• 如果出现抑制（丙二醇常见），由于 MVD=1 已无可加稀释空间，你就会方法不适用。
  
  

方案 B（给自己留“稀释”余地，推荐）

• 先把样液配得更浓一些，比如 S = 50 mg/mL（称 50 mg 定容至 1.00 mL）。
  这时：
  EL=0.012×50=0.60 EU/mLEL = 0.012 \times 50 = 0.60\ \text{EU/mL}
  若 λ=0.25\lambda = 0.25，则 MVD=0.60/0.25=2.4\text{MVD} = 0.60/0.25 = 2.4
  ⇒ 你可在不超过 2 倍稀释的范围内寻找能通过适用性的稀释度（比如 1×、2×）。
  
• 若仍有抑制，可考虑：
  
  
  • 选更敏感的 LAL 试剂（如 λ=0.125\lambda = 0.125 EU/mL，会把 MVD 翻倍）；
    
  • 改用光度法（动力学浊度/显色），通常比凝胶法更能容忍基质；
    
  • 必要时做更高起始浓度 S（只要溶解度、黏度允许），以获得更大的 MVD。
    
    

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是否“必须光度法”？

• 法规角度：通常三类 LAL 法（凝胶、浊度、显色）均可，只要方法适用性通过。并没有普遍性“禁止凝胶法”的硬性条款。
  
• 经验角度：丙二醇/甘油等多元醇类对凝胶形成容易有抑制，所以很多企业优先/最终采用光度法，并用合适稀释克服干扰。
  
  

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最小稀释倍数如何选？

• 不是“固定公式”，而是在不超过 MVD的前提下，通过适用性试验来“选出最低能通过的稀释倍数”。
  
• 你可以按 1×、2×、4×……逐级尝试（不超过 MVD），在能达到合格回收/阳性判定的那一档进行常规检验。
  
  

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一份可直接落地的小流程（供参考）

• 配液：称取 50.0 mg 丙二醇，加 BET 水至 1.00 mL（约 50 mg/mL）。
  
• 算 MVD：若 λ=0.25\lambda=0.25，MVD = 0.012×50/0.25=2.40.012 \times 50 / 0.25 = 2.4。
  
• 方法学：做 1× 与 2× 两档的适用性试验（空白、阳性对照、样品加标）。
  
  
  • 光度法：回收率 50–200% 为合格；
    
  • 凝胶法：阳性对照、加标应阳性，空白阴性。
    
    
• 选择：哪个稀释度通过且稀释倍数最低，就用哪个做常规检测。
  
• 判定：常规检测时按所选方法/稀释度，对照品梯度或标准曲线判定是否 ≤ 限度。
  
  

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小贴士

• 丙二醇是液体，但准确起见仍建议“称重”取样（mg 级），减少体积读数误差与黏滞性影响。
  
• 全程用LAL 试剂水与去热原器具；容器与 CSE（内毒素对照品）容器材质要匹配。
  
• 若凝胶法经多次尝试仍抑制，直接切换光度法往往更高效。
  
  

胜利者

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