人血白蛋白免疫电泳法注意事项

名侦探哒哒

如题，目前我在做人血白蛋白免疫点用实验（中国药典2025版3404），按照药典进行实验，配置3mm厚1.5%的琼脂糖胶（磷酸盐缓冲液与水1:1稀释），样品不稀释，进行水平电泳。跑到电极终点后进行加抗体37℃孵育24h，最终理论上应该会有沉淀线生成，但是我做不出来，没有沉淀线，染色脱色后也没有，求助是为什么。

机智鼠

在人血白蛋白免疫电泳实验中，若未观察到预期的沉淀线，可能原因包括：

1. 琼脂糖凝胶浓度或pH值不合适。建议检查是否严格按照中国药典2025版3404章节要求配制3mm厚、1.5%的琼脂糖胶（磷酸盐缓冲液与水以1:1比例稀释），并确保pH值适宜。

2. 样品处理不当。确保样品未经过度稀释或污染，且在加样前充分混匀。

3. 抗体孵育条件不满足。需确认抗体孵育温度为37℃，时间至少24小时，且孵育环境无干扰因素。

4. 染色与脱色步骤问题。使用适当浓度的染色剂和脱色剂，并遵循正确的染色与脱色程序。

5. 电泳操作失误。检查电泳电压、电流及电泳时间是否合适，以及电极是否清洁。

6. 设备校准问题。定期校准电泳设备，确保其性能稳定。

参考法规：《中华人民共和国药典》（2025年版）生物制品通则及相关章节。

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