环氧乙烷方法学验证-标准曲线

Mayhce

各位大神，我买的1000μg/ml的EO标准溶液，配制成1,2,4,6,8,10的浓度，可是跑出来的曲线，只有4μg/ml的出峰，其他都没有跑出来。

大体是这样的：



第一次配制时，是在室温下进行的，配制时，先从1000到100到10，然后从10稀释至1,2,4,6,8,10.跑出来的峰R2=0.98左右。


第二次在冰浴的水中进行的，咨询了相关人员，配制时，先从1000到100，然后从100稀释至1,2,4,6,8,10.只有4μg/ml的出峰，其他都没有跑出来。是哪里出了问题吗。我的配制过程怎么才能管控一下呢，谁能教教我呀。

18913555243

这个的确是头痛的事。我也是浓度低了很多，怀疑是移液器不准确，有没有用称重法配制下。我同事称重的，比我配得准。

Mayhce

18913555243 发表于 2025-11-17 16:25
这个的确是头痛的事。我也是浓度低了很多，怀疑是移液器不准确，有没有用称重法配制下。我同事称重的，比我 ...

称重法，没有使用,，需要研究一下怎么操作。问了其他人都说动作要快，本身就很容易挥发。为了防止挥发，还在冰浴中进行的。称重法是前后称重吗，怎么确定它的浓度呢

你我生而平凡

使用购买的环氧乙烷标准试剂作为储备液，储备液应在低温下（≤-18摄氏度）保存。
用储备液配制1μg/mL、3μg/mL、5μg/mL、7μg/mL、9μg/mL、10μg/mL六个系列浓度的标准溶液，精确量取5ml，密封于顶空瓶中，恒温（60℃±1℃）温度下平衡40min后，顶空进样。以环氧乙烷的出峰时间定性，以外标法-峰面积作为定量方法，绘制校正曲线。
接收标准：校正曲线的回归率R＞0.99以上。

你我生而平凡

（1）取0.5ml浓度10ug/ml标液加入20ml顶空瓶中，加入4.5ml纯净水密封 标注浓度为1ug/ml

（2）取1ml浓度10ug/ml标液加入20ml顶空瓶中，加入4ml纯净水密封 标注浓度为2ug/ml

（3）取2ml浓度10ug/ml标液加入20ml顶空瓶中，加入3ml纯净水密封 标注浓度为4ug/ml

（4）取3ml浓度10ug/ml标液加入20ml顶空瓶中，加入2ml纯净水密封 标注浓度为6ug/ml

（5）取4ml浓度10ug/ml标液加入20ml顶空瓶中，加入1ml纯净水密封 标注浓度为8ug/ml

（6）取5ml浓度10ug/ml标液加入20ml顶空瓶中                  
操作的时候要快，易挥发。记得带防毒面具

13063113060

我记得好像取点浓度改了吧，1-5-10-15-20.好像变成这5个点了，14233.1里面的之前就是你现在这6个点，现在文件升级改了。我顶空瓶里面也是把所需的水装好放冰箱冷藏了，至少不会让标液那么容易挥发

Hyql

现在到处都在卖 10ug/ml，稀释它干嘛 打开直接使用 不会出错。我有卖

Mayhce

你我生而平凡 发表于 2025-11-18 08:38
（1）取0.5ml浓度10ug/ml标液加入20ml顶空瓶中，加入4.5ml纯净水密封 标注浓度为1ug/ml

（2）取1ml浓度1 ...

谢谢，目前是这样操作的，我觉得已经很快了，再快点估计要出错了。不知道你们的快大约控制在多长时间之内啊，这个事，我也琢磨了很久了

Mayhce

13063113060 发表于 2025-11-18 08:47
我记得好像取点浓度改了吧，1-5-10-15-20.好像变成这5个点了，14233.1里面的之前就是你现在这6个点，现在文 ...

我查了一下14233.1-2022，1-20μg/ml至少5个浓度梯度。可以按照你说的浓度梯度进行稀释。请问一下，你用的是移液枪还是移液管进行梯度稀释？

抱琴揽风

之前做过环氧乙烷标准曲线，用移液器吸取时波动较大，后来特别注意了吸取后放液的细节，有些改善。另外环氧乙烷容易挥发，采用量取法确实不好操作，我用量取法做出来标准曲线的相关系数只能达到两个9。后来改为称重法进行操作，相关系数能做到3个9。建议稀释步骤尽可能少，否则累计误差就会大了，标准曲线做出来也不好。

抱琴揽风

抱琴揽风 发表于 2025-11-18 12:12
之前做过环氧乙烷标准曲线，用移液器吸取时波动较大，后来特别注意了吸取后放液的细节，有些改善。另外环氧 ...

补充：针对环氧乙烷标准曲线，在一次培训上和当地药检院的老师探讨了一下，他说环氧乙烷的标准曲线确实不好做，他认为标准曲线的相关系数能做到3个9也就算很不错了。

你我生而平凡

Mayhce 发表于 2025-11-18 10:45
谢谢，目前是这样操作的，我觉得已经很快了，再快点估计要出错了。不知道你们的快大约控制在多长时间之内 ...

我记得我之前操作是先将水移入顶空瓶中，封死。然后用注射器取样注射进顶空瓶
你可以再研究研究

Mayhce

抱琴揽风 发表于 2025-11-18 12:12
之前做过环氧乙烷标准曲线，用移液器吸取时波动较大，后来特别注意了吸取后放液的细节，有些改善。另外环氧 ...

求教一下，注意了哪些吸取后放液的环节呢，能否传授一下经验。

范范艾米

按理说买的标液应该不会出现不出峰的情况的。配制1~20浓度梯度的时候，先在各浓度的顶空瓶加水，再稀释标液。再在每个顶空瓶内加入相应的毫升数。移液器一定要精准，定期校准。我们用的是10000ug/ml的标液，做的还好的。

抱琴揽风

Mayhce 发表于 2025-11-19 08:39
求教一下，注意了哪些吸取后放液的环节呢，能否传授一下经验。

使用移液器放液时的手感很重要，你们可以用移液器吸取水试一下，把吸取的水放在天平上称量，看看每次吸取的量是否有大的波动。放液那个手感要很稳定，本身使用移液器取液就是一个微量的操作，稍不注意容易造成移液误差，从而导致配液的浓度不准。

Mayhce

范范艾米 发表于 2025-11-19 09:17
按理说买的标液应该不会出现不出峰的情况的。配制1~20浓度梯度的时候，先在各浓度的顶空瓶加水，再稀释标液 ...

目前也是先在各顶空瓶中加入相应数量的水，最后加标液。你用的10000μg/ml的浓度，那稀释的步骤更多，配制过程中，有用到冰浴吗。

oО星辰﹏

Hyql 发表于 2025-11-18 08:54
现在到处都在卖 10ug/ml，稀释它干嘛 打开直接使用 不会出错。我有卖

怎么卖