微生物负载

沙华

问一下各位前辈微生物负载怎么做啊 和微限有哪些区别，是在药典还是哪里有相关规定

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环湖

这是一个非常专业且重要的问题。微生物负载（Microbial Bioburden）和微生物限度（Microbial Limit）是药品微生物质量控制的两个核心概念，它们目的不同、阶段不同、方法也常有差异。

下面我为您清晰梳理两者的区别、具体做法和相关法规依据。

### 微生物负载（Bioburden）具体怎么做？

微生物负载检测没有统一的药典方法，但其建立和执行需遵循 GMP原则、ISO 11737-1/2 标准以及PDA TR等行业指南。

#### 第一步：制定内控标准与取样计划
1.  风险评估确定取样点：哪些是关键原料？哪个生产环节后污染风险最高？设备哪些部位最难清洁？
2.  设定警报限/行动限：基于历史数据、工艺验证结果和产品特性设定。例如，某注射剂原料的Bioburden行动限可能设定为 10 CFU/g，超过此限需调查并评估对终端灭菌效果的影响。
3.  规定取样方法：无菌棉签擦拭法（设备表面）、直接浸泡法（包装材料）、定量取样法（原料/中间产品）。

#### 第二步：检测方法建立与验证
虽然方法自定，但必须科学、有效、经过验证。
- 常用方法：
  - 薄膜过滤法：最常用，尤其适用于可溶的液体样品。将样品溶解后通过0.45μm或0.22μm的滤膜，冲洗后贴于琼脂培养基上培养计数。
  - 平皿倾注法/涂布法：适用于固体样品匀浆液或本身是液体的样品。取一定量直接或稀释后与琼脂混合倾注，或涂布于平板表面。
  - MPN法（最可能数法）：适用于污染菌量极低或含有抑菌成分的样品，但精度较差。
- 方法验证：必须进行，以证明该方法能准确回收样品中的微生物。验证项目包括：
  - 计数方法适用性试验：证明供试品本身无抑菌性，或抑菌性已被中和。
  - 回收率试验：使用代表性菌株（如铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉）接种至样品中，计算回收率，通常要求不低于70%。

#### 第三步：执行检测与数据分析
1.  按计划取样、检测。
2.  培养与计数：通常使用胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA） 在30-35℃培养3-5天计细菌数；使用沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA） 在20-25℃培养5-7天计霉菌和酵母菌数。
3.  趋势分析：将数据绘制成趋势图，监控工艺的清洁度、稳定性和异常波动。趋势分析比单个数据点更重要。

#### 第四步：关联灭菌工艺
这是Bioburden检测的终极目的。在灭菌工艺验证时，必须使用高生物负载的样品来挑战灭菌工艺，以证明其能将微生物杀灭至低于10^-6的无菌保证水平。

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### 微生物限度（Microbial Limit）具体怎么做？

微生物限度检查有严格的法定程序，主要依据《中国药典》通则。

#### 第一步：明确药典要求
- 通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
- 通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法
- 通则1107 非无菌药品微生物限度标准

#### 第二步：进行“微生物计数法”检查
1.  方法适用性试验：这是强制性前提！ 在首次检验或产品组分、检验条件变更时，必须进行。目的是确认供试品在该检验条件下无抑菌活性。需用5种代表菌株（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉）进行回收率试验。
2.  供试品检查：
    - 平皿法：包括倾注法和涂布法。
    - 薄膜过滤法：适用于有抑菌性的样品。
    - 培养后计数，报告每g或每ml的菌落数（CFU）。

#### 第三步：进行“控制菌检查”
根据药品的给药途径和原料来源，按药典规定检查相应的致病菌。例如：
- 口服给药制剂：常检大肠埃希菌、沙门菌。
- 局部给药制剂：常检铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌等。
- 使用选择性培养基进行增菌、分离和鉴定。

#### 第四步：判断结果
将计数结果和控制菌检查结果，与通则1107的法定标准进行比对，出具“符合规定”或“不符合规定”的结论。

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### 相关法规与指南来源

1.  《药品生产质量管理规范》（GMP）：核心框架，要求对中间产品和工艺过程进行微生物监控。
2.  《中国药典》：
    - 通则1105、1106、1107：微生物限度检查的金标准。
    - 通则9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则：适用于新方法验证。
    - 通则9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则：涉及环境监控。
3.  国际标准：
    - ISO 11737-1:2018 医疗保健产品的灭菌 - 微生物学方法 - 第1部分：产品上微生物总数的测定。
    - ISO 11737-2:2019 第2部分：灭菌过程的定义、确认和维护中进行的无菌试验。
    - PDA Technical Report (TR) 22, TR 62 等。
4.  ICH Q6A、Q9：关于质量标准制定和风险管理的指导原则。

### 总结
- 微生物负载是过程控制的眼睛，为灭菌工艺保驾护航，标准自定。
- 微生物限度是产品放行的尺子，确保非无菌药品安全，标准法定。

在实操中，许多企业会将微生物限度检查的方法（如薄膜过滤法）经过调整和验证后，用于微生物负载的检测，因为其方法学原理相通。但必须清楚，两者的目的、标准和报告形式有本质区别。建立微生物负载程序时，一定要基于产品和工艺进行风险评估，并形成完整的内部管理文件。

papermaking

你可以粗略认为微生物负载是定量，微限是定限，前者大多数是验证用，后者是放行用

大呆子

微生物计数呗

jinn512

上面说的都挺对的，都是用来给样品做一个微生物计数，只不过是一个是为了得到样品自然状态的微生物的负载情况，一个是为了确认样品在各工艺流程流转之后的微生物负载是否能控制在法规或者自定标准范围内

hhhhhhjjjjj

其实都一样的，都是微生物计数

lxiaof

微生物负载用于中间体微生物检测，可以是企业内控标准。微生物限度用于产品放行检测。药典对此没有规定