SDS凝胶电泳

づ落葉ぴ無痕 · 发表于 2013-1-28 18:40:05

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请问SDS凝胶电泳中，样品加样量和跑胶时的电压怎么确定？小弟新人，求大神指导

是是而非 · 发表于 2013-1-28 21:19:56

样品加样量在你的检测项下没有规定吗？如果没有规定体积不超过样品梳的体积都行。或10或20UL都可以，如果谱带不明显，可以增加样品浓度。跑胶电压在药典二部附录P34有具体规定

づ落葉ぴ無痕 · 发表于 2013-1-28 22:16:23

yujieli2008 发表于 2013-1-28 21:19
样品加样量在你的检测项下没有规定吗？如果没有规定体积不超过样品梳的体积都行。或10或20UL都可以，如果谱 ...

谢谢指导。药典规定垂直板电泳初始电压为80V，为什么有的时候工作中用30V，怎么确定的？加样量没规定，所以不晓得要加多少啊，顺便问一下，样品是反相HPLC时好像不容易加进样品梳里面，是方法有问题吗？

merlynhuang · 发表于 2013-1-28 22:31:48

反相HPLC的蛋白样品，你可能要增加loading buffer量。主要是pH，还有有机溶剂的问题

longstory · 发表于 2013-1-28 22:42:04

够新的新人

，SDS-PAGE道道很多，在试验里面慢慢学习吧。在这里三言两语恐怕不行，看看分子克隆那本书，有关于这方面详尽的描述。

づ落葉ぴ無痕 · 发表于 2013-1-28 22:43:42

merlynhuang 发表于 2013-1-28 22:31
反相HPLC的蛋白样品，你可能要增加loading buffer量。主要是pH，还有有机溶剂的问题

能具体点么？哪个资料上有详细的说明。今天加的反相HPLC的蛋白样品不像其他的往下沉，就在加样点不动，蛋碎了一地。刚进公司一周的实习生让我干这个，快哭了

づ落葉ぴ無痕 · 发表于 2013-1-28 23:14:10

longstory 发表于 2013-1-28 22:42
够新的新人，SDS-PAGE道道很多，在试验里面慢慢学习吧。在这里三言两语恐怕不行，看看分子克隆那本书，有 ...

高人啊。推荐的书很好，我刚看了一下。实际操作好多问题呀，苦逼的我没有培训，本来要带我的主管也跳槽了。只能请教一下下啦。先加阴极缓冲液还是先拔梳（我两个上司答案不一样啊）；做图谱分析时，直接用手拿把胶放进去吗？阴极缓冲液和阳极缓冲液要加多少啊？、、、SOS、、、、

longstory · 发表于 2013-1-28 23:25:51

づ落葉ぴ無痕发表于 2013-1-28 23:14
高人啊。推荐的书很好，我刚看了一下。实际操作好多问题呀，苦逼的我没有培训，本来要带我的主管也跳槽了 ...

不要泄气，慢慢摸索吧。顺便告诉你一下，我招的的一个SDS-PAGE检验人员第一个月差点跑了，因为压力大。

不过他不是学生物的，难为他了。

现在都好了，图谱弄得很漂亮

づ落葉ぴ無痕 · 发表于 2013-1-28 23:29:08

づ落葉ぴ無痕发表于 2013-1-28 23:14
高人啊。推荐的书很好，我刚看了一下。实际操作好多问题呀，苦逼的我没有培训，本来要带我的主管也跳槽了 ...

十分感谢！

阴极电极在哪边，我做的是垂直的

syhorchid · 发表于 2013-1-28 23:29:53

学习学习

づ落葉ぴ無痕 · 发表于 2013-1-28 23:34:54

longstory 发表于 2013-1-28 23:25
不要泄气，慢慢摸索吧。顺便告诉你一下，我招的的一个SDS-PAGE检验人员第一个月差点跑了，因为压力大。 ...

谢谢鼓励

是是而非 · 发表于 2013-1-29 20:41:07

づ落葉ぴ無痕发表于 2013-1-28 22:16
谢谢指导。药典规定垂直板电泳初始电压为80V，为什么有的时候工作中用30V，怎么确定的？加样量没规定，所 ...

有的时候工作中用30V，怎么确定的？这个不知道，没有用过
样品不容易加入是否考虑缓冲液加一些甘油？

づ落葉ぴ無痕 · 发表于 2013-1-29 21:55:01

yujieli2008 发表于 2013-1-29 20:41
有的时候工作中用30V，怎么确定的？这个不知道，没有用过
样品不容易加入是否考虑缓冲液加一些甘油？

小分子多肽吧可能，我新手。做的是Tricine-SDS-PAG，初始电压是30V

期待GMP · 发表于 2014-5-5 11:37:49

电压影响电泳时间和最后图谱是否好看清晰，而上样量主要看染色后样品带颜色的深浅来决定，，