微生物提问帖002 细胞消化胰酶

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-9-25 08:45:23

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本帖最后由仲夏秋夜云于 2013-9-25 12:59 编辑

各位，小斑竹不才，做了一个微生物相关问题征集。传送门：https://www.ouryao.com/forum.php?mod=viewthread&tid=179564&page=1#pid1597826
凡是大家有疑问、有争议的地方，小斑竹会拿来开贴和大家公开讨论，希望各位积极交流，知无不言言无不尽，谢谢！

现在，坛友砍柴樵夫提问（问题编号：002）：

细胞消化胰酶的最适浓度是多少？用在生物反应器的浓度是一样的吗？

请大家在此贴中讨论，谢谢各位参与！

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-9-25 09:20:22

@dasheng1980

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-9-25 12:42:29

微生物细菌细胞相关问题征集汇总贴
https://www.ouryao.com/forum.php? ... 4&fromuid=38958

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-9-25 12:46:17

我个人的理解，当然不是越高越好的。消化胰酶对细胞的损害也是很大的。因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++， Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0，温度37℃其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hank's液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液浓度为：（1）0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA。（2）0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA。（3）0.25%胰蛋白酶。溶液pH8.0～9.0，使用D-Hank's液配制。多数细胞传代消化可使用0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA这种消化液。

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-9-25 20:41:23

仲夏秋夜云发表于 2013-9-25 09:20
@dasheng1980

谢谢，大家各尽所能，一起学习么！
敬请关注其他的微生物提问帖，其他你能回答的，也尽力回答一下吧！

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-9-29 15:37:04

@砍柴樵夫

ccgame · 发表于 2013-11-26 17:47:52

细胞消化液中一般使用胰蛋白酶+EDTA，ph 8.0 37℃。EDTA有消化作用，但在体系中主要螯合2价Ca、Mg离子，来保证胰蛋白酶活性。
个人觉得在反应器中，胰酶浓度应比培养瓶中小。因为1.相对培养瓶中液体来说，反应器中的液体剪切力较大，对细胞膜完整性要求较高，胰酶对细胞膜伤害是很大的。2.培养瓶中细胞不会完全是单层，对应的胰酶浓度就不是针对单层细胞的，但是反应器中的细胞一般都不会聚集太多，所以消化液浓度应该要小一些。
当然，个人意见，仅供参考。

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-11-27 08:43:02

ccgame 发表于 2013-11-26 17:47
细胞消化液中一般使用胰蛋白酶+EDTA，ph 8.0 37℃。EDTA有消化作用，但在体系中主要螯合2价Ca、Mg离子，来 ...

非常专业……必须加分

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-11-27 08:43:17

@砍柴樵夫

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