预制培养基适用性

绯浠

我想请教一下各位老师预制的TSA培养基都怎么做适用性，用涂布法的话，55mm的滴多少合适，0.1ml吗？这0.1ml的菌浓度是100cfu/ml吗？90mm的能直接加1ml100cfu的菌液涂布，会不会太多

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我也好奇，还有新的国标里，培养基适用性的培养温度好像不一样

依然星期三

涂布法一般是0.1ml，倾注法一般1ml，

世间始终你好

以下回复来自chatgpt,内容仅供参考：


你提到的是对TSA培养基的适用性验证（即恢复率实验），这在药典和无菌检查/微生物限度相关实验中非常重要。下面我从方法、接种量、菌液浓度几个关键点来系统回答你的问题：

---

一、适用性验证的基本思路适用性验证的目的是验证你所使用的培养基是否适合检测目标微生物，即是否具有足够的恢复率（≥70%）。典型步骤：

• 使用标准菌株（如枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等）；
  
• 用一定浓度（如100 CFU/mL）的菌悬液；
  
• 滴加一定体积（如0.1mL、1mL）至培养基表面或与待测样品处理后一道进行；
  
• 涂布均匀后培养；
  
• 统计菌落数，计算恢复率。
  
  

---

二、不同培养皿直径的建议接种量培养皿直径推荐接种体积（涂布法）合理菌落数范围（CFU）备注
55 mm（小皿）0.1 mL10-100 CFU体积太大会造成水淹现象
90 mm（标准皿）0.1~1.0 mL10-100 CFU常用0.1 mL 或 1.0 mL，1mL不会太多，但菌浓度要合适你的理解是对的：

• 55mm皿建议滴加 0.1 mL，不能太多，否则液体铺不开，影响计数。
  
• 菌液浓度若是 100 CFU/mL，那0.1 mL ≈10 CFU，是比较理想的。
  
• 90mm皿滴加 1 mL的100 CFU/mL菌液 ≈100 CFU，也合理，不会“太多”，但必须均匀涂布，避免菌群重叠。
  
  

---

三、药典的浓度建议（以中国药典、USP为参考）

• 一般建议接种菌液中的菌数为10~100 CFU；
  
• 所以你可以配制 100 CFU/mL的菌悬液；
  
• 然后根据培养皿大小，分别滴加 0.1 mL（得10 CFU） 或 1 mL（得100 CFU）。
  
  

---

四、恢复率计算举例（适用性判断）假设你原始菌液接种在平板上，长出了95个菌落；再用同样方法加到含有抗生素/抑菌样品后的平板，长出了65个菌落，则：
恢复率=6595×100%=68.4%（不合格）恢复率 = \frac{65}{95} \times 100\% = 68.4\% \quad （不合格）药典要求：恢复率 ≥ 70%，才算培养基适用或抗菌样品干扰被排除。

---

总结你的问题问题答案
55mm TSA平皿涂布菌液滴多少合适？推荐 0.1 mL
这0.1 mL菌液浓度为多少？推荐用 100 CFU/mL，即接种约10 CFU
90mm TSA皿能直接加1 mL、100 CFU/mL菌液吗？可以，总菌数为100 CFU，不会太多，但需均匀涂布

---

逸清草堂

世间始终你好 发表于 2025-8-6 12:59
以下回复来自chatgpt,内容仅供参考：

这个回答不太好

世间始终你好

逸清草堂 发表于 2025-8-6 14:00
这个回答不太好

不知道怎么回答才能让你满意

绯浠

世间始终你好 发表于 2025-08-06 12:59
以下回复来自chatgpt,内容仅供参考：


你提到的是对TSA培养基的适用性验证（即恢复率实验），这在药典和无菌检查/微生物限度相关实验中非常重要。下面我从方法、接种量、菌液浓度几个关键点来系统回答你的问题：
一、适用性验证的基本思路适用性验证的目的是验证你所使用的培养基是否适合检测目标微生物，即是否具有足够的恢复率（≥70%）。典型步骤：
使用标准菌株（如枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等）；
用一定浓度（如100 CFU/mL）的菌悬液；
滴加一定体积（如0.1mL、1mL）至培养基表面或与待测样品处理后一道进行；
涂布均匀后培养；
统计菌落数，计算恢复率。

二、不同培养皿直径的建议接种量培养皿直径推荐接种体积（涂布法）合理菌落数范围（CFU）备注
55 mm（小皿）0.1 mL10-100 CFU体积太大会造成水淹现象
90 mm（标准皿）0.1~1.0 mL10-100 CFU常用0.1 mL 或 1.0 mL，1mL不会太多，但菌浓度要合适你的理解是对的：
55mm皿建议滴加 0.1 mL，不能太多，否则液体铺不开，影响计数。
菌液浓度若是 100 CFU/mL，那0.1 mL ≈10 CFU，是比较理想的。
90mm皿滴加 1 mL的100 CFU/mL菌液 ≈100 CFU，也合理，不会“太多”，但必须均匀涂布，避免菌群重叠。

三、药典的浓度建议（以中国药典、USP为参考）一般建议接种菌液中的菌数为10~100 CFU；
所以你可以配制 100 CFU/mL的菌悬液；
然后根据培养皿大小，分别滴加 0.1 mL（得10 CFU） 或 1 mL（得100 CFU）。

四、恢复率计算举例（适用性判断）假设你原始菌液接种在平板上，长出了95个菌落；再用同样方法加到含有抗生素/抑菌样品后的平板，长出了65个菌落，则：
恢复率=6595×100%=68.4%（不合格）恢复率 = \frac{65}{95} \times 100\% = 68.4\% \quad （不合格）药典要求：恢复率 ≥ 70%，才算培养基适用或抗菌样品干扰被排除。
总结你的问题问题答案
55mm TSA平皿涂布菌液滴多少合适？推荐 0.1 mL
这0.1 mL菌液浓度为多少？推荐用 100 CFU/mL，即接种约10 CFU
90mm TSA皿能直接加1 mL、100 CFU/mL菌液吗？可以，总菌数为100 CFU，不会太多，但需均匀涂布

好的，谢谢老师，我还有一个问题，对照培养基制成平皿后，也是同样涂布0.1ml吗

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世间始终你好

绯浠 发表于 2025-8-6 14:07
好的，谢谢老师，我还有一个问题，对照培养基制成平皿后，也是同样涂布0.1ml吗

是的，对照培养基制成的平皿在做适用性验证时，同样可以涂布 0.1 mL 的菌液，以与测试用培养基平皿形成对比，以下是具体说明：

---

一、对照培养基的作用对照培养基是指没有添加待检样品的培养基，用于作为菌落数的对照参考，计算恢复率时使用。

恢复率（%） = 测试培养基平皿的菌落数 ÷ 对照培养基平皿的菌落数 × 100%

---

二、操作方法一致性无论是测试培养基平皿还是对照培养基平皿：
步骤说明
接种体积通常都为 0.1 mL，尤其是55mm皿
菌液浓度100 CFU/mL 最常用，这样每皿接种约10 CFU，便于计数
涂布方式使用无菌涂布棒、L形玻棒等均匀涂开
培养条件同一温度、时间培养（如3035°C，培养35天）

---

三、注意事项

• 对照皿和测试皿的接种操作、培养条件必须完全一致；
  
• 一般每种培养基和每种菌株要做 至少3个平皿重复，取平均值；
  
• 若对照平皿本身菌落数量偏少（<10 CFU），统计误差大，建议调浓度或用更多重复组。
  
  

---

四、补充示意（以55mm皿为例）项目操作
菌液浓度100 CFU/mL
滴加体积0.1 mL
接种菌数约10 CFU
涂布皿种类对照TSA平皿 × 3、测试TSA平皿 × 3
培养条件3035°C，35天（按菌种要求）
判断标准恢复率 ≥ 70% 合格

---

如你希望对接种量做更精确控制，也可使用 螺旋接种仪、稀释涂布法、滤膜法 等替代。

绯浠

依然星期三 发表于 2025-08-06 12:56
涂布法一般是0.1ml，倾注法一般1ml，

好的，谢谢老师

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逸清草堂

世间始终你好 发表于 2025-8-6 14:03
不知道怎么回答才能让你满意

错的太明显的就不是很好，会误导人，是这个意思

世间始终你好

逸清草堂 发表于 2025-8-6 14:14
错的太明显的就不是很好，会误导人，是这个意思

求打假，我也给chatgpt上一课

逸清草堂

世间始终你好 发表于 2025-8-6 14:15
求打假，我也给chatgpt上一课

自个翻药典吧

小雨滴答滴

逸清草堂 发表于 2025-08-06 14:00
这个回答不太好

想请教一下你对这个实验的看法 已经看到好几条帖子下面有您的回复了 均是隐藏锋芒的评论 想必是教授级别的大人物呢 可以详谈一下吗

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逸清草堂

小雨滴答滴 发表于 2025-8-6 14:25
想请教一下你对这个实验的看法 已经看到好几条帖子下面有您的回复了 均是隐藏锋芒的评论 想必是教授级别 ...

少来，我就是键盘侠杠精

绯浠

世间始终你好 发表于 2025-08-06 14:08
是的，对照培养基制成的平皿在做适用性验证时，同样可以涂布 0.1 mL 的菌液，以与测试用培养基平皿形成对比，以下是具体说明：
一、对照培养基的作用对照培养基是指没有添加待检样品的培养基，用于作为菌落数的对照参考，计算恢复率时使用。
恢复率（%） = 测试培养基平皿的菌落数 ÷ 对照培养基平皿的菌落数 × 100%
二、操作方法一致性无论是测试培养基平皿还是对照培养基平皿：
步骤说明
接种体积通常都为 0.1 mL，尤其是55mm皿
菌液浓度100 CFU/mL 最常用，这样每皿接种约10 CFU，便于计数
涂布方式使用无菌涂布棒、L形玻棒等均匀涂开
培养条件同一温度、时间培养（如3035°C，培养35天） 三、注意事项对照皿和测试皿的接种操作、培养条件必须完全一致；
一般每种培养基和每种菌株要做 至少3个平皿重复，取平均值；
若对照平皿本身菌落数量偏少（&lt;10 CFU），统计误差大，建议调浓度或用更多重复组。

四、补充示意（以55mm皿为例）项目操作
菌液浓度100 CFU/mL
滴加体积0.1 mL
接种菌数约10 CFU
涂布皿种类对照TSA平皿 × 3、测试TSA平皿 × 3
培养条件3035°C，35天（按菌种要求）
判断标准恢复率 ≥ 70% 合格如你希望对接种量做更精确控制，也可使用 螺旋接种仪、稀释涂布法、滤膜法 等替代。

好的，非常感谢

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门门

逸清草堂 发表于 2025-8-6 14:28
少来，我就是键盘侠杠精

来一起扯皮嘛，别总一句话把天聊死呀！

Mr●小肚子♂

55和90的平皿实际操作上涂0.1ml是比较合适的（个人感觉55的可以再少一些，比如0.05ml），GPT是加入不大于100CFU的菌量，所以你的菌浓应该是不大于1000CFU/ml
另外回收率药典的要求是0.5-2，0.7固然更好，但是你不一定能成功，加入10CFU的菌量涂布也很容易误差超出范围，AI都是搜集网上资源搞出来的，但是网上的资源对错都有。谨慎甄别

不见猫骨头

90mm的接种0.1ml不大于100cfu的菌悬液，太多涂不干，湿哒哒的；55mm的接种0.05ml不大于100cfu的菌悬液

逸清草堂

门门 发表于 2025-8-6 17:53
来一起扯皮嘛，别总一句话把天聊死呀！

他要找教授级别的，我没有这个水平

小雨滴答滴

逸清草堂 发表于 2025-08-07 10:02
他要找教授级别的，我没有这个水平

那只能说您很能装了 把这样一个讨论问题的帖子搞得乌烟瘴气 自己又不说问题在哪里 装什么啊 是不是教授不知道 听不懂人话你是第一名 装货

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