.【求助】大肠杆菌表达重组蛋白

zhulikou431

大肠杆菌表达胸腺素六串体，工程菌已构建好，复苏扩增的时候，SDS-PAGE可确认目的蛋白的表达，但是一进行大规模的培养（上发酵罐）----80L，就发现蛋白表达几乎是为零，请问各位大师问题会出在哪里

仲夏秋夜云

换个检定方法。SDS-PAGE不是很说明问题的，有时候就是没分开。
也有可能种子被污染

寒刀

第一问题出现在扩大生产这里，怀疑质粒缺失，宿主排斥（判定依据为如果你的质粒有抗生素基因，在扩大规模生产时加入对应抗生素，如果有表达，基本就确认是质粒丢失了）；第二请确认你复苏扩增的时候不加抗生素？最后建议你问问研发的人有没有什么想法，谁构建的工程菌谁最熟悉，首先肯定是确认质粒有没有丢失，再找其他原因。