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楼主: 仲夏秋夜云
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2015版中国药典微生物项变化的应对策略—菌种

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药徒
发表于 2015-5-26 09:59:04 | 显示全部楼层
luckylala 发表于 2015-5-25 21:09
将保藏的菌在斜面上划线,生长5-7天产生孢子后加入适宜稀释液(参照药典),震荡后吸取浓孢子悬液稀释至规 ...

谢谢,我还有一个比较纠结的问题,比如阳性对照检查,我直接从菌种斜面取菌种直接加到样品中,不计算加入菌的浓度,行不行?还是必须得进行菌悬液的制备?
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药士
发表于 2015-5-28 15:42:02 | 显示全部楼层
深海游鱼 发表于 2015-5-26 09:59
谢谢,我还有一个比较纠结的问题,比如阳性对照检查,我直接从菌种斜面取菌种直接加到样品中,不计算加入 ...

不行,因为规定加入小于100cfu的菌量,若为斜面直接挑去肯定大于100cfu
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发表于 2015-5-28 15:50:33 | 显示全部楼层
想请问一下菌悬液的制备,比如是黑曲,是先把斜面预培养后再稀释然后培养,还是先从斜面取样菌做成菌悬液再 ...将保藏的菌在斜面上划线,生长5-7天产生孢子后加入适宜稀释液(参照药典),震荡后吸取浓孢子悬液稀释至规定梯度即可,小于100cfu的孢子悬液经过验证可以在稀释液中保存一个月,随用随取
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药徒
发表于 2015-5-28 22:56:26 来自手机 | 显示全部楼层
谢谢,好好学习了
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药徒
发表于 2015-6-8 20:56:24 | 显示全部楼层
luckylala 发表于 2015-5-20 18:02
冷冻管取出后回温半小时,直接将内容物全部倒入培养基中进行培养,我们都是一种菌做完当中至少消毒30分钟 ...

1.在什么条件下回温?
2.你们一共保藏了多少种菌?除了是药典中无菌与微生物限度检查用的菌种外还有其它菌种吗?
3.你们配制SDA或RBA培养基时如何调节配制前的pH值。
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药士
发表于 2015-6-8 21:41:56 | 显示全部楼层
whictgao 发表于 2015-6-8 20:56
1.在什么条件下回温?
2.你们一共保藏了多少种菌?除了是药典中无菌与微生物限度检查用的菌种外还有其它 ...

1、室温下回温,10-30度
2、除了药典检验菌株:金葡、枯草、大肠、铜绿、生孢、白念、黑曲,日常菌库中的环境oos等有上百种
3、RBA我们买三药的,SDA买的Merck,配制灭菌后pH均在药典规定范围内,所以不需要调节,如果需要调节,在配制时可以先摸索经灭菌的变化规律,然后在配制前用1M的氢氧化钠或盐酸调节至相应pH,保证灭菌后在规定值
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发表于 2015-6-17 14:04:30 | 显示全部楼层
写的非常好,请问楼主,生孢梭菌的保存你们也是采用低温吗,我这个菌采用低温,但是保存时间很短,3个月就不行了,我采用的是-70℃甘油保存
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药徒
发表于 2015-7-31 13:24:19 | 显示全部楼层
菌种复苏的时候,是将干粉菌种加入培养基进行培养吗?干粉与培养基的比例是多少?培养条件及时间是什么?培养后的培养基是凝固的还是液体状态?如果是凝固的,如何分装?没做过微生物,想了解下。
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发表于 2016-2-20 11:16:49 | 显示全部楼层
真的是太好了,学习了,如果再增加些菌种确认的方法及方法来源就更好了
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药生
发表于 2016-2-20 11:34:09 | 显示全部楼层
好帖子,学习
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发表于 2016-4-13 10:58:24 | 显示全部楼层
谢谢楼主无私的分享,真的学到了很多!关于黑曲霉孢子悬液的制备,我们用的方法也是跟楼主一样的呢。
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发表于 2016-4-15 09:55:02 | 显示全部楼层
3) 菌株保藏
其实在确认同时我们即进行了保藏,若确认不合格,则销毁该批次保藏批的菌株,我们实验室的保藏方法很简单,也是借鉴08-09年我的领导去中检所培训带回来的保藏方法,即使用液体培养基复苏菌液,然后加入等量的20%甘油,制成含10%甘油的菌悬液,然后分装至1ml/支,可以保存2年,但是黑曲霉我们是保藏孢子悬液,贮存于-15℃以下,有效期是1年。
这里的有效期需要经过验证吗?
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药徒
发表于 2016-5-26 15:38:58 | 显示全部楼层
xxl学习了!!
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药徒
发表于 2016-10-11 10:29:19 | 显示全部楼层
请教黑曲霉冻存管制作:购买黑曲霉0代后,1.用少量液体培养基溶解;2.转移到液体培养基增菌培养(1代);3.转移到SDA斜面培养(2代);4.洗脱为孢子液;5.加20%的甘油;6.分装为数只冻存管;不知道是否正确?请指教!再有能否从一代直接加甘油制作冻存管?
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药徒
发表于 2016-10-11 10:29:32 | 显示全部楼层
请教黑曲霉冻存管制作:购买黑曲霉0代后,1.用少量液体培养基溶解;2.转移到液体培养基增菌培养(1代);3.转移到SDA斜面培养(2代);4.洗脱为孢子液;5.加20%的甘油;6.分装为数只冻存管;不知道是否正确?请指教!再有能否从一代直接加甘油制作冻存管?
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药徒
发表于 2016-10-11 10:30:22 | 显示全部楼层
请教黑曲霉冻存管制作:购买黑曲霉0代后,1.用少量液体培养基溶解;2.转移到液体培养基增菌培养(1代);3.转移到SDA斜面培养(2代);4.洗脱为孢子液;5.加20%的甘油;6.分装为数只冻存管;不知道是否正确?请指教!再有能否从一代直接加甘油制作冻存管?
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发表于 2016-10-30 18:37:38 | 显示全部楼层
谢谢分享  非常感谢
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发表于 2016-11-17 15:58:33 | 显示全部楼层
非常感谢楼主,学习了不少
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药徒
发表于 2016-12-28 15:13:29 | 显示全部楼层
谢谢楼主分享,感谢
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药徒
发表于 2017-3-4 09:16:16 | 显示全部楼层
真是好东西,谢谢分享
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