关于微生物菌种的问题请教大家并讨论

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疑问1：菌种复苏时，部分菌种复苏使用培养基与规定的增菌培养基不一致，因此使用时应按2代菌操作方式使用。但是，若菌种复苏与增菌培养培养基一致，那么是否需要两次传代？1代菌能否作为标准贮备菌株？

冻干粉（0代）→复苏（1代菌）→分装（标准贮备菌株）

冻干粉（0代）→复苏（1代菌）→增菌培养（2代）→分装（标准贮备菌株）

因为有人提到1、2代菌种的稳定性不是很好，那么标准贮备菌株使用2代菌进行增菌到3代使用是菌种就比较稳定了，使用1代标准贮备菌株增菌到2代使用时，风险是不是较高？

疑问2：菌液的制备与使用

中国药典2015版中《微生物计数法》中提到使用菌株的新鲜培养物稀释制备菌液，同时在《控制菌检查法》中菌液制备提到了培养过程并使用培养物稀释制备菌液。

那么，按照正常理解方式新鲜培养物应该是工作菌株增菌培养后的产物，而且应新鲜培养后直接稀释使用。

问题1：菌液稀释制备后只有24小时有效期（2～8℃），制备不大于100CFU的菌液应该培养计数进行确认，培养计数结果出来时，菌液早已失效，那么只有进行同步测试，这时大大增加了检测的成本与风险。

问题2：假如先培养计数再稀释使用，那么菌种增菌培养后，置于2～8℃下保存一定时间，那么是否还能满足新鲜培养物的要求，增菌培养过程只提及了多少温度培养多少时间，但是培养后再次放入2～8℃是否还能作为新鲜培养物使用？（放回2～8℃存放是要做有效期确认的。）

疑问3：工作菌株的代数

工作菌株使用时，应先进行增菌培养，那么增菌过程即计传代1次，那么使用时菌种代数不能超过5代，那么工作菌株的代数最大为4代。

我看到有人使用5代菌工作菌株的使用时，是复温后作为新鲜培养物看直接稀释而不进行增菌培养，这样的操作应该是有问题的吧？

北重楼

衷大大

看的有点晕

binbinbaobao_00

有点复杂啊

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和你有同样的疑问，如果你有答案了，麻烦告诉我一下，谢谢。