有关内毒素的试验

小飞鱼爱太阳

2015版药典中，1143细菌内毒素检查法中有些不明白的地方：
1、内毒素限值得确定：比如检查注射用水，规定不超过0.25eu/ml。是不是注射用水的内毒素限值就是0.25eu/ml？
2、如何确定MVD？药典中是这样描述的：

“确定最大有效稀释倍数（MVD）  最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液被允许达到稀释的最大倍数（1→MVD），在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。用以下公式来确定MVD：

MVD=cL/λ

式中  L为供试品的细菌内毒素限值；

c为供试品溶液的浓度，当L以EU/mg或EU/U表示时，c的单位需为mg/ml或U/ml，当L以EU/ml表示时，则c等于1.0ml/ml。如需计算在MVD时的供试品浓度，即最小有效稀释浓度，可使用公式c=λ/L；

λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml），或是在光度测定法中所使用的标准曲线上最低的内毒素浓度。”

我想问下如果假设我们买的鲎试剂的灵敏度是0.25eu/ml。注射用水规定的限值是0.25eu/ml，那么如何确定MVD??

3、干扰实验中已经知道了供试品是阴性，那么为何在凝胶限度试验的时候还要检测供试品是阴性？？？？

谢谢大家的回答！~~~~~~~~

我是一支蒲公英

注射用水应该直接检验就可以了吧，不需要MVD计算应该
干扰试验是验证样品能否通过这种检测方法，用这种方法检验是否有效！对第三个问题没太理解你说的意思

A水杉

MVD就是1呀，第三个问题没看懂啥意思

君瀹

回答一下第三个问题，干扰试验和凝胶限度的实验所用的供试品不是同一个供试品，干扰试验的供试品是已知的阴性供试品，凝胶限度试验中的供试品是内毒素浓度未知的样品，需要通过稀释来确定内毒素含量的。

小飞鱼爱太阳

君瀹 发表于 2016-8-30 08:54
回答一下第三个问题，干扰试验和凝胶限度的实验所用的供试品不是同一个供试品，干扰试验的供试品是已知的阴 ...

还是不是很理解，2015版药典中写到干扰试验中“使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过最大有效稀释倍数（MVD）的溶液”。本来做干扰实验的目的就是比较鲎试剂与内毒素的反应在水溶液中进行和在检品中进行的差异。你的意思是提前处理供试品？？将内毒素尽可能去掉？？我可以这样理解吗，就是将供试品中所有影响内毒素测定的因子都排除掉？？？
2、这个不超过有效稀释倍数？ 怎么理解？怎么确定？？
坐等回复！~~~~~~~

君瀹

小飞鱼爱太阳 发表于 2016-8-30 09:21
还是不是很理解，2015版药典中写到干扰试验中“使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过最大有效稀释 ...

之前的回答是有点错误的，现在更正一下啊，干扰试验中的供试品不应该是阴性的，就比如注射水就不能做干扰试验的供试品，只是说供试品的内毒素的含量一般是在一个可控的范围内的，我们需要通过这个这个已知的范围去稀释供试品，也就是说最好的结果是一个相邻梯度内正好保证一个是凝胶而另一个不凝胶。还有，供试品的阴性和阳性是针对稀释梯度和鲎试剂的灵敏度而言的。
好了，关于最大稀释倍数的确定在药典中有明确的公式，我就不写了，是根据你的供试品的内毒素区间来确定的。

小飞鱼爱太阳

君瀹 发表于 2016-8-30 14:31
之前的回答是有点错误的，现在更正一下啊，干扰试验中的供试品不应该是阴性的，就比如注射水就不能做干扰 ...

"就比如注射水就不能做干扰试验的供试品"为什么注射用水不能做干扰实验的供试品？那什么样的水才可以做干扰实验的供试品？？？  坐等回复！~

小飞鱼爱太阳

小飞鱼爱太阳 发表于 2016-8-30 15:19
"就比如注射水就不能做干扰试验的供试品"为什么注射用水不能做干扰实验的供试品？那什么样的水才可以做干 ...

最大稀释倍数药典里给了，我想问下，最小稀释倍数如何确定？

君瀹

小飞鱼爱太阳 发表于 2016-8-30 15:19
"就比如注射水就不能做干扰试验的供试品"为什么注射用水不能做干扰实验的供试品？那什么样的水才可以做干 ...

这么说有点绝对了，注射用水是不适合用在0.25eu的灵敏度的，0.003的其实还是可以用的，因为注射水的标准是≤0.25EU每毫升的。供试品应该是有一定范围的内毒素样品。最好就用你们日常需要检测的样品，这样的样品一般经过除内毒素工艺后的内毒素范围都比较稳定，对于供试品的稀释建议采用BET水，这个可以采购的。

小飞鱼爱太阳

君瀹 发表于 2016-8-30 15:29
这么说有点绝对了，注射用水是不适合用在0.25eu的灵敏度的，0.003的其实还是可以用的，因为注射水的标准 ...

嗯，如果我只是单纯的稀释供试品，让他在不超过最大稀释倍数时没有干扰，不用刻意的去除内毒素，这样可行吗？

君瀹

小飞鱼爱太阳 发表于 2016-8-30 15:38
嗯，如果我只是单纯的稀释供试品，让他在不超过最大稀释倍数时没有干扰，不用刻意的去除内毒素，这样可行 ...

在检测过程中是不能干扰内毒素的和鲎试剂的反应，除内毒素工艺一般是在纯化阶段进行的。内毒素的检测就是为了确认纯化阶段的除内毒素工艺的效果的。