生物制品检查常见缺陷问题

朱小美

本文来自蒲公英小一班周日（9月18日）蒲友：忐忑江南分享

各位蒲友，

大家好，今天有幸给各位探讨下关于生物制品常见缺陷问题分析。因生物制品，各工序复杂，如种子库，发酵，纯化以及制剂，涉及到方方面面的东西特别多，与各位蒲友分享下，不足之处，还请各位海涵啊。。

下面我就按照正常生物制品流程，来大概讲解下生物制品准备过程中需要准备事项以及需要注意的问题：

种子库：一个项目菌种从立项开始，到真正构建种子库，一般需要工程菌株构建，构建的菌株在满足项目需求后，一般就会开始建菌种库。建库之前，需要明确基因、载体、菌株正规来源，需要发票、COA等；涉及到宿主细胞，需要明确其传代历史。菌株构建过程中，涉及到委托加工的，如基因合成，菌种检定，电镜扫描等，都需要明确委托检定合同，发票以及相关检定单位资质的证明性文件等。相关菌株的构建，是否满足要求，需要从多方面判断，如产品，杂质水平，是否能满足批与批之间的一致性等。

菌种构建结束，满足需求后，开始构建种子库。种子库一般分为原始种子库，主种子库和工作种子库。关注点包括菌种制备现场环境控制、相关设备验证情况、制备操作规程、制备记录可溯源性、制备所使用的原始种子的可溯源性。其中主种子库和工作种子库需要在GMP条件下建立，这一条也是特别重要的。在种子库建立过程中，一般分为工艺培养，制备加上后期的各检测项的检定。检定合格后，就可以通过放行使用。这一块需要强调的是，种子一般需要当做物料管理，所以菌种库构建结束后，需要请验，QC按流程进行取样，检定，各检测项合格后，通过QA放行。以上GMP条件下的建立以及菌种当做物料管理是经常会被检察官提及的，也是企业忽视地方。

菌种保存管理：菌种的保存控制一般需要注意为双人双锁，外来人员控制，人员授权管理，菌种异地备份，运输验证，温度持续监控，后备电源，冰箱开关门时间控制，防冻保护以及菌种的领出，入库记录，以及销毁记录等。菌种的使用管理，需要明确每支的去掉，剩余数量以及每次取出的编号控制等。文件控制如种子领用台账、种子批管理授权、种子批异地备份申请、种子批制备记录、种子批异地备份申请、种子批销毁记录等。

发酵：

种子培养：需要确保甘油管从取出传递至使用点的过程控制，如时间，传递器具保护等；另外还需要关注甘油管融化方式，一般建议采用水浴快速融化。需要明确摇瓶制备阶段，种子的培养时间以及终点的判断，包括如何控制污染措施等，如增加镜检。

发酵培养：

（1）工艺要有明确的发酵模式（batch、feed-batch）及发酵周期、发酵规模、发酵工艺参数（温度、pH、诱导剂浓度、诱导时间等），制定内控要求（污染监测、OD、溶氧量、pH等参数），应关注单位产量、表达产物质量、总产量。发酵添加物避开抗生素和动物源组分。

（2）另外，各工序时间的控制，如发酵前期，中期以及后期需要明确各阶段的分界点以及时间间隔。

（3）发酵各中间过程若不连续，需要确定各中间产物的稳定性数据。

（4）涉及到GMP其他方面，还需要明确活菌控制，如人流进出分开，废弃物以及洁净服用后及时灭活处理；废弃菌液的灭活处理等。

纯化：

（1）对介质（强调供应商）、柱高、直径、缓冲液、洗脱液、收峰条件（大于多少AU收样、小于多少AU停止收样）等主要参数均要明确，另外要制定内控要求（流速、上样量、回收率），要注重层析填料的使用寿命和不同使用次数后杂质去除情况研究；

（2）各层析步骤的收率以及总收率需要明确，各层析步骤的杂质去除需要明确；

（3）填料管理：明确合格供应商，如何对填料进行检验，检验标准如何制定等，以及填料的使用寿命，填料的保存方式以及填料的清洗验证等；

（4）其他纯化设备管理，如中空纤维系统，膜包的完整性测试，使用寿命，以及保存方式等；

（5）缓冲液，各中间产物的稳定性数据支持。

制剂方面：因涉及到和其他化药无菌工艺差不多，就不过多介绍了。但需要注意的是，生物制品基本需要低温控制，过程需着装控制内毒素污染等因素。

其他相关注意点：

（1）计算机类管理：三级权限，数据备份等，图谱控制等；

（2）年度审核；

（3）车间偏差与变更控制，涉及到文件，以及人员培训等；

（4）设备方面，常规设备验证，设备维护保养，紧急性维护保养，计划性维护保养都需要核对合格项目是否齐全，时间是否合适等；另外，设备的固定资产管理这块也需要重视；

（5）现场布局：是否适于员工操作，维护与保养，是否适合记录，便于观察，都需要现场工艺人员进行核对，特别是一些公用介质的管道，也需要特别的注意，管道的排布，相关计量表的安装，管道的标识等，是否能够良好的观察，操作与记录，都需要一一核实。

（6）原辅料/起始物料的质量标准制定，需基于原厂质量标准和检验结果的基础上，如范围较宽应适当收紧。建立质量标准必须有原厂或法定标准为参考资料。并且检验时需关注与原厂报告书检验结果的差异

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朱小美

@豚鼠  我要小红花 超版主

syhorchid

谢谢分享

清风化雨

致谢!!

好好

没有分析测试部份呢

夏菡小屋

您好，咨询一下，委托加工，如基因合成，菌种检定和电镜等，委托单位的资质如何确定？需要什么资质？

~小魔女~

感谢楼主分享，刚接触生物制品非常有用。

kunshanese

谢谢分分享

yhh

谢谢分享！

申b3ef9f0e

谢谢分享！

policeman

感谢楼主分享，下载好好学习

15011333435

楼主总结的很好，我们就遇到一个现实的问题，在即将建库时，突然老总意识到细胞库是不是需要在GMP条件下进行，当时我们的设备连3Q认证都没有做，中试车间新建，按照类GMP做的，都所有的计划都已经排上日程了，但是现在全部停止开始进行3Q认证。

小金库

谢谢楼主的分享