蒲公英 - 制药技术的传播者 GMP理论的实践者

 找回密码
 立即注册

QQ登录

只需一步,快速开始

使用微信帐号登录

使用微信帐号登录

查看: 2594|回复: 39
收起左侧

清洁验证-真实的谎言告诉你真实的回收率

  [复制链接]
药生
发表于 2019-8-13 22:20:09 | 显示全部楼层 |阅读模式
清洁验证-真实的谎言告诉你真实的回收率[url=]百乐门GMP夜总会[/url] [color=rgba(0, 0, 0, 0.298)]4月19日
PHARM ARTICLES原创文章

作者:中仑研究院        发表于:2018-09-01
作者:半知菌目
编辑:北京中仑工业微生物研究院
版权:原创文章,独家版权



  序言:从70%到50-200%,2015年版《中国药典》的回收率标准降低了吗?且听半知菌目娓娓道来......

  一、回收率的规定
  中国药典2015年版4部,对于回收率是这样规定的:接种不大于100cfu 每一试验菌株平行制备2 个平皿。检培被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0. 5~2 范围内,且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。

  这段话中包含如下的信息:

  1.回收率:50~200%;
  2.接菌量小于100cfu。

  微生物检验员应该都不会忘记中国药典2010年版及之前对于回收率的要求吧:

  1. 回收率大于70%;
  2. 接种量:50~100cfu。

  为什么中国药典会做出这样的改变?中国药典对回收率标准的改变,是标准降低了吗?

  回收率,做为评价培养基的关键指标,它的合格与否直接决定了培养基的主要指标促生长能力的优劣。而回收率测定,又与测试的标准菌株息息相关、密不可分。

  二、微生物生长曲线
  我们从微生物的生长曲线开始谈起,

  单细胞微生物接种纯种到一定容积的液体培养基后,在适宜的条件下培养,定时取样测定细胞数量。以细胞增长数目的对数做纵坐标,以培养时间做横坐标,绘制一条如上图所示的曲线,我们称这条曲线为细菌的生长曲线。曲线显示了细菌的生长繁殖的4个时期:迟缓期,对数生长期,稳定期,衰亡期

  用来测试培养基回收率的菌悬液,即接种涂布在固体培养基表面那0.1毫升、小于100cfu的测试菌,必然包含了上述迟缓期,对数生长期,稳定期,衰亡期的微生物,其生长性能,在培养基上表现出的生长活性是有所不同的。那100cfu个微生物中,处于对数生长期,稳定期的,其生长活性必然旺盛,而处于迟缓期、衰亡期的微生物,其生长活性必定不如前者。

  三、回收率的合格标准
  因此,对于测试培养基来说,回收率合格与否,一定要与对照培养基(标准培养基)生长的同种测试菌种的数量来对比,回收率测试的合格标准一定是一个动态的标准,测试培养基的合格标准就是对照培养基(标准培养基)的上下2倍范围。
  反映在回收率的合格标准上,50~200%的合格范围,直接决定因素就是对照培养基(标准培养基)上生长的微生物数量,随每次检测的不同而呈现出一定幅度的变化。而不是给回收率规定一个一成不变的固定数值。每一次对测试培养基回收率试验与对照培养基(标准培养基)的比值决定了这次回收率的合格的上下限,并没有设定一个单一的,固定不变的合格限度。这样一个动态的回收率判定的规定,更加符合微生物的生长特性,而且在实际的培养基适用性试验检测活动中更有实际意义。

  四、回收率的高低
  那么回收率的高低说明什么呢?对于同一批次培养基,2次回收率测试如果分别是51%,99%,说明了什么?

  如果回收率测试方法正确,回收率数值的高低第一不可以评价培养基质量优劣;第二不可以评判检验员测试水平高低。如果2次测试同一批培养基,分别得出51%,99%两个回收率数据,或者两位检验员对一个批次培养基测试分别得出51%,99%两个回收率数据,只要测试方法正确,这两个回收率数据评价这批次培养基第一都是合格的,第二两个数据是等效的。而不是回收率高,培养基质量好或检验员水平高;回收率低,培养基质量差或检验员水平低。因此,这种情况下回收率数字的高与低,反映出了测试菌悬液的生长状态,毕竟微生物是有生命的。

  回收率试验其实就是用“活”的微生物来测试“死”的培养基,要证明“死”的培养基合格,如何操作“活”的微生物成了关键。
  五、回收率的测试方法
  回收率测试方法,对于固体培养基而言,就是中国药典2015年版新引入的“涂布法”。涂布法就是在测试固体培养基表面涂布小于100cfu测试微生物,按照规定的方法培养后计数并计算回收率。该方法的关键操作有两点:

  第一,菌悬液的制备与稀释;
  第二,涂布方法。


  第一点药典上已经有了详细说明。
  涂布方法,药典只简单说了在测试培养基上加入不少于0.1mL菌悬液(不超过100cfu微生物)。在涂布法测试中,0.1mL菌悬液和不超过100cfu微生物,这两个数字都必须满足吗?

  要回答这个问题,首先要明确的是对于测试培养基的回收率来说,0.1mL菌悬液和不超过100cfu这两个数据要求,对回收率而言,那个更关键呢?毫无疑问,回收率测试就是要考察涂布在培养基上那100cfu的微生物,测试培养基的支持生长能力,测试培养基的回收率即由此决定。而0.1mL毫升的接菌数量,对于不同规格的培养基来说,在保证涂布均一性的提前下,90mm平板加入0.1mL是可以的,对于150mm平板,要保证涂布的均一性,加入0.1mL是远远不够的,加菌量至少需要0.2-0.3mL;而对于55mm的接触平板,因为其表面呈现为凸面,且表面积不足90mm平板的40%,若仍加入0.1mL涂布,加菌后未等涂布均匀菌悬液就会溢出培养基表面了,极容易出现回收率非常低下的测试结果,因此对于55mm的接触平板,回收率测试时的加菌量应该少于0.1mL,以0.05mL为宜。但是,对于不同规格的培养基,涂布法的加菌量可以不同,但加菌的数量都应该遵循不超过100cfu这一原则。

回收率测试试验,对于不同培养基,不同配制时间的培养基,涂布的方法也是所不同的,这个话题接下来会谈及。

















回复

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-18 17:28:45 | 显示全部楼层
1. 药典规定的是“不少于0.1ml”,不是0.1ml。
2. 用于试验的菌种,必须是经过检查的,不应该存在“迟缓期,对数生长期,稳定期,衰亡期”的明显差异。
回复 支持 1 反对 0

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-14 08:22:06 | 显示全部楼层
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-14 11:11:37 | 显示全部楼层
学习一下,谢谢分享

点评

大上海  楼主你好,不客气,相互学习  详情 回复 发表于 2019-8-14 11:15
回复 支持 反对

使用道具 举报

药生
 楼主| 发表于 2019-8-14 11:15:31 | 显示全部楼层
晶a1330699 发表于 2019-8-14 11:11
学习一下,谢谢分享

楼主你好,不客气,相互学习
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2019-8-14 14:00:14 | 显示全部楼层
学习一下,谢谢分享
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-15 09:04:57 | 显示全部楼层
这个可以,解释的挺全面的,感谢分享。
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2019-8-15 09:20:22 | 显示全部楼层
学习了谢谢分享
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-15 09:32:48 | 显示全部楼层
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-15 09:39:58 | 显示全部楼层
涂布法会不会导致菌成片生长,不易计数?
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-15 14:16:25 | 显示全部楼层
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-15 14:25:43 | 显示全部楼层
接种微生物处于不同生命周期对培养结果的影响,学到了
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2019-8-15 15:32:32 | 显示全部楼层
学习了谢谢分享
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-15 16:23:09 | 显示全部楼层
你这说的是微生物的回收率。清洁验证,讲的是活性成分残留的回收率
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-15 17:10:57 | 显示全部楼层
不错的视角
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2019-8-16 09:29:06 | 显示全部楼层
路过学习,讲的挺好。
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-16 11:13:01 | 显示全部楼层
学习了,谢谢
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2019-8-16 14:16:54 | 显示全部楼层
路过学习,讲的好
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-16 17:15:25 | 显示全部楼层
学习了谢谢分享
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2019-8-17 16:40:31 | 显示全部楼层
大神级人物      
回复 支持 反对

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册

本版积分规则

×友情提示
1、无权下载附件会员可能原因:1.“待验证用户组“,请点击注册邮箱里面收到的确认邮件即可; 2.作者设定权限的,提高用户组级别即可
2、对本站的任何疑问或合作需求,请联系微信tank066,关于怎样提高用户组/积分:https://www.ouryao.com/thread-6764-1-1.html
3、注册用户在本社区发表、转载的任何作品仅代表其个人观点,不代表本社区认同其观点。
4、如果存在违反国家相关法律、法规、条例的行为,我们有权在不经作者准许的情况下删除其在本论坛所发表的文章。
5、所有网友不要盗用有明确版权要求的作品,转贴请注明来源,否则文责自负。

QQ|手机版|蒲公英|ouryao|蒲公英 ( (京)-非经营性-2014-0058 京ICP备14042168号 京ICP证150354号 )

GMT+8, 2019-12-15 17:06 , Processed in 0.097342 second(s), 114 queries .

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2012 Comsenz Inc.

返回顶部