为什么用OD260/OD280评定核酸纯度

郝小琴

为什么用OD260/OD280评定核酸纯度

核酸的最大吸收波长是260nm，这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。

在波长260nm紫外线下，1 OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml；单链DNA或RNA为40μg/ml；寡核苷酸为20μg/ml。可以此来计算核酸样品的浓度。

通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值（A260/A280）可以估计核酸的纯度。纯DNA的比值为1.8，纯RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8，说明制剂中RNA尚未除尽。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低。样品中如混有RNA比值上升。

（紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日 星期二 11:40目的： 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法。原理： 核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于

双链DNA

浓度为50μg/ml，单链

寡核苷酸

的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。试剂与仪器： 提取的质粒DNA，紫外分光光度仪。操作步骤：1)

分光光度计

先用水在260nm和280nm两个波长下校零。2) 取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入

分光光度计

的石英比色杯中。3) 在260nm和280nm分别读出样品光密度值。如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍，即如OD<SUB>260</SUB>=0.1，则样品浓度即为1μg/μl。4) 若OD<SUB>260</SUB>/OD<SUB>280</SUB>大于1.8，说明仍有RNA，可以考虑用

RNA酶

处理样品，若小于1.8，说明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化DNA。 ）

扩展资料

显示DNA的传统方法是富尔根（Feulgen）反应，切片先用稀盐酸处理，DNA经弱酸（1mol/L HCL）水解后，在60℃条件下使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应生成紫红色产物。

原理同PAS反应，使细胞核DNA显紫红色。在此过程中RNA不受影响，故染色具有DNA特异性。准确的温度和盐酸浓度，适宜的水解时间是成功的关键。水解过度或不足均降低染色强度。

核酸可分为脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）和核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）。

核酸不但是一切生物细胞的基本成分，还对生物体的生长、发育、繁殖、遗传及变异等重大生命现象起主宰作用。它在生物科学的地位，可用“没有核酸就没有生命”这句话来概括。

syhorchid

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郝小琴

syhorchid 发表于 2020-1-21 14:27
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honganj

谢谢分享！