细胞冻存、解冻方法与细胞计数

圣剑之心 · 发表于 2012-9-8 08:25:29

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细胞冻存、解冻方法与细胞计数
一、细胞冷冻保存
1.材料：
生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene　5000-0020)、0.4％（w/v）trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII)
2、冷冻保存方法：
（1）传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-80℃16～18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。
-20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
（2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。

细胞冻存、解冻方法与细胞计数.rar (3.54 KB, 下载次数: 276)

xxcc2050 · 发表于 2012-9-8 08:41:53

谢谢楼主分享啊

巴西木 · 发表于 2012-9-8 09:04:17

谢谢楼主分享啊

scolce · 发表于 2012-9-9 14:05:00

一篇很基础但是有很重要的文章。

Anne · 发表于 2012-9-9 14:05:49

这个不太懂，学习下

青涩涩 · 发表于 2012-9-29 08:09:31

{:soso_e163:}{:soso_e165:}谢谢

zzh908 · 发表于 2012-12-8 13:07:07

谢谢您的分享

dasheng1980 · 发表于 2012-12-30 19:55:31

谢谢楼主！

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-1-5 15:21:52

大圣，你真的没想过要投靠生物制药吗？

圣剑之心 · 发表于 2013-1-5 20:57:35

仲夏秋夜云发表于 2013-1-5 15:21
大圣，你真的没想过要投靠生物制药吗？

曾经做过发酵这块的，但是一直没有机会

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-1-6 12:58:43

圣剑之心发表于 2013-1-5 20:57
曾经做过发酵这块的，但是一直没有机会

现在不流行说发酵，流行说生物反应……

砍柴樵夫 · 发表于 2013-1-6 13:02:38

谢谢分享

圣剑之心 · 发表于 2013-1-6 14:23:43

仲夏秋夜云发表于 2013-1-6 12:58
现在不流行说发酵，流行说生物反应……

呵呵，玩这个也玩了好几年

dasheng1980 · 发表于 2013-3-20 14:22:16

谢谢楼主！支持！

xiaobin2007 · 发表于 2013-9-18 15:01:13

谢谢楼主的分享，辛苦了。

ss德普叔 · 发表于 2014-1-19 09:45:33

谢谢楼主分享

laughktle · 发表于 2017-1-23 10:51:43

学习学习

sanmaosyh · 发表于 2017-2-5 11:59:57

非常详细，太感谢楼主了

忞勣 · 发表于 2018-3-28 12:25:25

我们公司将冻存管细胞直接放入4度预冷的冻存盒中，再直接转移至-80度冰箱，1-7内再转移至液氮中长期保存

safsaf · 发表于 2018-7-9 22:57:03

谢谢楼主分享，了解了

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