蛋白纯化，洗脱蛋白延后，杂质峰未完全分离

qq821885840 · 发表于 2021-9-24 08:51:48

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各位亲们，大家帮忙给分析一下，我做的反相层析，同一个样品，用两种溶液洗脱，注射用水和纯乙腈，开始第一个批次正常，后边连续做了两个批次，出峰时间延后了大约15min，填料是新装的，想不出缘由来，各位大神一块给分析一下！谢谢了！

cao392090417 · 发表于 2021-10-8 10:58:20

流动相温度是否一致？

qq821885840 · 发表于 2021-10-9 16:31:20

cao392090417 发表于 2021-10-8 10:58
流动相温度是否一致？

流动相温度一样，都是常温。但是样品可能温差有5℃左右的。但是用另一台设备来做这个，出峰及峰型就一直都很正常。所以我想这到底是柱子的问题还是设备的问题？从哪几个方面排查呢？

海豚1234 · 发表于 2021-10-11 12:19:02

检查层析泵流速是否正常，上样量是否合适

qq821885840 · 发表于 2021-11-9 14:17:58

海豚1234 发表于 2021-10-11 12:19
检查层析泵流速是否正常，上样量是否合适

泵速单独测试了，A泵、B泵都没问题。上样量和第一个批次一样，是按照柱子载量计算的，没有超载。

qq821885840 · 发表于 2021-11-9 14:19:06

大家帮忙分析一下都有哪些因素会影响蛋白的保留时间？谢谢大家了！

放生. · 发表于 2021-11-13 14:19:28

qq821885840 发表于 2021-11-09 14:19
大家帮忙分析一下都有哪些因素会影响蛋白的保留时间？谢谢大家了！

层析柱问题

qq821885840 · 发表于 2021-11-16 09:29:46

放生. 发表于 2021-11-13 14:19
层析柱问题

填料是新换的，使用了十几次。而且每天都会再生保存。装柱都是按照标准执行的！填料就批次不一样。

小林77 · 发表于 2021-11-18 11:31:06

前70分钟这是干什么用了？乙腈的比例变化幅度大就不稳定吧。

zhuoyuewu · 发表于 2021-11-29 21:38:14

应该是柱子问题

疏大平 · 发表于 2022-1-13 16:57:29

延迟会不会是填料量比以前的多？峰没有分离可能跟你压住没有压好的原因。做之前测柱效看看

qq821885840 · 发表于 2022-1-26 15:58:14

我们分析了良久，到现在也找不到原因，不过把样品稀释后再上柱，就会好一点。这是啥原因呀？各位大神帮忙分析一下！谢谢了！