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楼主: hangzhouhdjy
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[检验及监测] 宿主蛋白残留HCP样品稀释的选择

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发表于 2022-2-28 17:17:22 | 显示全部楼层
这应该不是hook效应吧
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发表于 2022-3-25 13:27:05 | 显示全部楼层
您好,有在论坛看到您的帖子,随着稀释倍数增加,测出来的残留量会有增加。其实在测残留量之前咱们要对样本进行一个最小稀释倍数的确定   不知道您这边有没有这步操作
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发表于 2022-3-28 20:56:50 | 显示全部楼层
这个问题叫非线性稀释,凡是测HCP都会出现,与HCP抗体有关,检测有些样本特别明显。这个避免不了。只能找合适的稀释度,关于如何报告检测值,相关法规上已经有详细的指导原则,本人研究HCP试剂盒多年了,一点经验。
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发表于 2022-3-29 21:56:37 | 显示全部楼层
哥们,不知道你的问题解决了没有?我感觉问题可能来自两方面,一是样品中有物质存在干扰,导致了你所使用方法的准确度不好;还有一种可能是方法本身的问题,可能这个浓度可能已经低于你方法的定量限了,所以结果也是不准的;建议你摸一下方法的准确度和定量限 ,我估计定量限至少在你第二次的结果上是做不过去的。
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药徒
 楼主| 发表于 2022-4-20 10:31:18 | 显示全部楼层
18901792493 发表于 2022-3-25 13:27
您好,有在论坛看到您的帖子,随着稀释倍数增加,测出来的残留量会有增加。其实在测残留量之前咱们要对样本 ...

我们是打算确定一个最小稀释倍数的,但是结果不理想。

厂家的资料提到,采用2倍的梯度来稀释样品,得到一系列的稀释后的样品。再把后一个稀释浓度的结果和前一个稀释浓度的结果进行比较。
例如:2倍稀释的结果/未稀释的结果、4倍稀释的结果/2倍稀释的结果,比例在80~120%,且检测值不低于LOQ。
这样就能满足最小稀释倍数的要求,我的理解是这样,不知道对不对?
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药徒
 楼主| 发表于 2022-4-21 09:00:30 | 显示全部楼层
18643065891 发表于 2022-3-29 21:56
哥们,不知道你的问题解决了没有?我感觉问题可能来自两方面,一是样品中有物质存在干扰,导致了你所使用方 ...

解决了,我们更换成第二代试剂盒,第一代不再使用。

当初,准确度和定量限的考察,我们有进行过的。用第一代试剂盒,回收率只有50%左右,对样品稀释过,回收率也没有明显的提升,因此准确度和定量限没成功。

后来,更换成第二代试剂盒。稀释样品之后,回收率逐步提高了,最终能确保在70~130%
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发表于 2022-8-31 13:48:41 | 显示全部楼层
钩状效应即HOOK效应,是指由于抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象,其中抗体过量叫做前带效应;抗原过量叫做后带效应。
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发表于 2022-11-21 16:47:44 | 显示全部楼层
您好,请问你们现在解决这个问题了吗?我们目前也遇到了类似的问题,并且加标回收也是异常的。
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发表于 2023-4-7 13:12:09 | 显示全部楼层
是试剂盒质量问题    试剂盒研发时干扰测试做的不好   
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发表于 2023-5-8 13:19:23 | 显示全部楼层
你好,你的问题解决了吗?我们目前也遇到这个问题,越稀释检测出来的结果越大。
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发表于 2023-5-8 13:40:38 | 显示全部楼层
你好,请问问题解决了吗,我们现在也遇到这个问题,一直不知道哪个检测结果是准确的。
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发表于 2023-5-30 11:36:09 | 显示全部楼层
是不是因为其他原因的干扰啊?一般选择试剂盒都要做验证的,需要确认最小稀释倍数和定量下限,通过已知hcp含量回收率找到一个没有干扰或者干扰程度可接收的最小稀释倍数。
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发表于 2023-7-4 17:20:41 | 显示全部楼层
你这边的蛋白浓度是举例1mg/ml吧。一般如果是高浓度的,可能会有基质效应,会出现你说的越稀释越高。一般要稀释到5mg/ml以下,然后才开始进行梯度稀释。
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发表于 2024-7-9 15:17:25 | 显示全部楼层
微醉的细胞 发表于 2023-5-8 13:19
你好,你的问题解决了吗?我们目前也遇到这个问题,越稀释检测出来的结果越大。

请问问题解决了吗?我现在也遇到这个问题,稀释到两万多倍才出现一点点的变化,前面的倍数,OD值都是不变的。我做的是CHO HCP的试剂盒
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