宿主蛋白残留HCP样品稀释的选择

二三心扉 · 发表于 2022-2-28 17:17:22

这应该不是hook效应吧

18901792493 · 发表于 2022-3-25 13:27:05

您好,有在论坛看到您的帖子，随着稀释倍数增加，测出来的残留量会有增加。其实在测残留量之前咱们要对样本进行一个最小稀释倍数的确定不知道您这边有没有这步操作

yanfeig · 发表于 2022-3-28 20:56:50

这个问题叫非线性稀释，凡是测HCP都会出现，与HCP抗体有关，检测有些样本特别明显。这个避免不了。只能找合适的稀释度，关于如何报告检测值，相关法规上已经有详细的指导原则，本人研究HCP试剂盒多年了，一点经验。

18643065891 · 发表于 2022-3-29 21:56:37

哥们，不知道你的问题解决了没有？我感觉问题可能来自两方面，一是样品中有物质存在干扰，导致了你所使用方法的准确度不好；还有一种可能是方法本身的问题，可能这个浓度可能已经低于你方法的定量限了，所以结果也是不准的；建议你摸一下方法的准确度和定量限，我估计定量限至少在你第二次的结果上是做不过去的。

hangzhouhdjy · 发表于 2022-4-20 10:31:18

18901792493 发表于 2022-3-25 13:27
您好,有在论坛看到您的帖子，随着稀释倍数增加，测出来的残留量会有增加。其实在测残留量之前咱们要对样本 ...

我们是打算确定一个最小稀释倍数的，但是结果不理想。

厂家的资料提到，采用2倍的梯度来稀释样品，得到一系列的稀释后的样品。再把后一个稀释浓度的结果和前一个稀释浓度的结果进行比较。
例如：2倍稀释的结果/未稀释的结果、4倍稀释的结果/2倍稀释的结果，比例在80~120%，且检测值不低于LOQ。
这样就能满足最小稀释倍数的要求，我的理解是这样，不知道对不对？

hangzhouhdjy · 发表于 2022-4-21 09:00:30

18643065891 发表于 2022-3-29 21:56
哥们，不知道你的问题解决了没有？我感觉问题可能来自两方面，一是样品中有物质存在干扰，导致了你所使用方 ...

解决了，我们更换成第二代试剂盒，第一代不再使用。

当初，准确度和定量限的考察，我们有进行过的。用第一代试剂盒，回收率只有50%左右，对样品稀释过，回收率也没有明显的提升，因此准确度和定量限没成功。

后来，更换成第二代试剂盒。稀释样品之后，回收率逐步提高了，最终能确保在70~130%

刘璇 · 发表于 2022-8-31 13:48:41

钩状效应即HOOK效应,是指由于抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象，其中抗体过量叫做前带效应；抗原过量叫做后带效应。

无恙env · 发表于 2022-11-21 16:47:44

您好，请问你们现在解决这个问题了吗？我们目前也遇到了类似的问题，并且加标回收也是异常的。

皖r7sqaa8p · 发表于 2023-4-7 13:12:09

是试剂盒质量问题试剂盒研发时干扰测试做的不好

微醉的细胞 · 发表于 2023-5-8 13:19:23

你好，你的问题解决了吗？我们目前也遇到这个问题，越稀释检测出来的结果越大。

微醉的细胞 · 发表于 2023-5-8 13:40:38

你好，请问问题解决了吗，我们现在也遇到这个问题，一直不知道哪个检测结果是准确的。

沉迷吃鸡 · 发表于 2023-5-30 11:36:09

是不是因为其他原因的干扰啊？一般选择试剂盒都要做验证的，需要确认最小稀释倍数和定量下限，通过已知hcp含量回收率找到一个没有干扰或者干扰程度可接收的最小稀释倍数。

shuicaoping · 发表于 2023-7-4 17:20:41

你这边的蛋白浓度是举例1mg/ml吧。一般如果是高浓度的，可能会有基质效应，会出现你说的越稀释越高。一般要稀释到5mg/ml以下，然后才开始进行梯度稀释。

Andrewponchos · 发表于 2024-7-9 15:17:25

微醉的细胞发表于 2023-5-8 13:19
你好，你的问题解决了吗？我们目前也遇到这个问题，越稀释检测出来的结果越大。

请问问题解决了吗？我现在也遇到这个问题，稀释到两万多倍才出现一点点的变化，前面的倍数，OD值都是不变的。我做的是CHO HCP的试剂盒

[检验及监测] 宿主蛋白残留HCP样品稀释的选择