宿主蛋白残留HCP样品稀释的选择

hangzhouhdjy · 发表于 2021-12-28 10:29:03

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大家好，请教一下：

我在检测样品的宿主蛋白残留时发现，越是稀释样品，宿主蛋白残留越高。

比如：样品蛋白浓度为1mg/ml。当样品稀释至0.5mg/ml，宿主蛋白为12.21ng/ml，则样品的宿主蛋白残留是：24.42ng/mg
样品蛋白浓度为1mg/ml。当样品稀释至0.1mg/ml，宿主蛋白为27.37ng/ml，则样品的宿主蛋白残留是：273.7ng/mg

一般情况下，随着不断地稀释，样品的宿主蛋白检测值，应该不断下降才是，为何现在却不断升高？

朋友们有遇到过类似的情况不？

姣妹崽 · 发表于 2021-12-28 12:13:33

ELISA的检测，都遇到过，目前也还在找解决方法

每文 · 发表于 2021-12-28 13:27:42

你们内部有经过调查嘛，该样品检测了几次？是同一人检测嘛？

每文 · 发表于 2021-12-28 13:29:40

看下是不是你们的模板设的不合适。

hangzhouhdjy · 发表于 2022-1-6 10:47:12

每文发表于 2021-12-28 13:27
你们内部有经过调查嘛，该样品检测了几次？是同一人检测嘛？

同一批产品，复检了3次。具体是，由3个不同的实验员，分3天独立进行。结果都是如此。

hangzhouhdjy · 发表于 2022-1-6 10:52:06

每文发表于 2021-12-28 13:29
看下是不是你们的模板设的不合适。

我们对比了，同一个厂家、同一种类型的试剂盒，用第一代试剂盒检测出来的结果，越稀释越升高。用第二代试剂盒检测出来的结果，越稀释越下降。
厂家没有明确答复，关于第一代和第二代试剂盒，针对我们产品的检测，本质上的区别。
厂家是CYGNUS，宿主蛋白残留HCP的检测试剂盒，几乎是行业主要推荐，一定程度等同于垄断/金标准。

hangzhouhdjy · 发表于 2022-1-6 10:56:57

姣妹崽发表于 2021-12-28 12:13
ELISA的检测，都遇到过，目前也还在找解决方法

是的，因此不知道稀释到什么程度，才符合要求。

我的检测结果，和厂家官网提供的参考资料，差别较大。（厂家：CYGNUS）

因此，我很难判断，到底是产品本身的残留量就有这么多，还是试剂盒不适用于检测此产品。

此外，同厂家，同类型的试剂盒，第二代就会出现，越稀释越降低的情况。厂家没有给出明确的答复。

每文 · 发表于 2022-1-6 12:19:49

hangzhouhdjy 发表于 2022-1-6 10:52
我们对比了，同一个厂家、同一种类型的试剂盒，用第一代试剂盒检测出来的结果，越稀释越升高。用第二代试 ...

嗯嗯我们也用的是他们家的试剂盒目前还没碰到过这种情况看厂家咋说吧之前我用过瑞普利金的试剂盒有明显的批次差异。

姣妹崽 · 发表于 2022-1-7 10:44:15

每文发表于 2022-1-6 12:19
嗯嗯我们也用的是他们家的试剂盒目前还没碰到过这种情况看厂家咋说吧之前我用过瑞普利金的试剂盒 ...

BSA的试剂盒也有同样的问题，CYGNUS的厂家也给不出答复来，个人认为这个金标准是要破除的

hangzhouhdjy · 发表于 2022-1-10 10:19:24

姣妹崽发表于 2022-1-7 10:44
BSA的试剂盒也有同样的问题，CYGNUS的厂家也给不出答复来，个人认为这个金标准是要破除的

是的，金标准是要破除的。
期待早日有更多同类的试剂盒，出来和CYGNUS竞争，间接促进它提供更好的服务。

Our original Pichia pastoris HCP ELISA Kit (F140) has broad reactivity to peptide epitopes and a small population of antibodies that recognize Pichia glycosylation epitopes. In cases where the recombinant protein product is also glycosylated, there is potential for some cross-reactivity that can result in either an over-estimation of true HCP or indeterminate HCP concentrations, due to the lack of sample dilution linearity. The antibody used in this kit is the same polyclonal antibody that is used in the original kit, except that it has been subjected to an additional affinity absorption step to remove antibodies to glycosylation epitopes and is more specific than the first-generation Pichia pastoris Kit (F140).

我们的原始毕赤酵母HCP ELISA试剂盒 (F140)对肽表位和一小部分识别毕赤酵母糖基化表位的抗体具有广泛的反应性。在重组蛋白产物也被糖基化的情况下，由于缺乏样品稀释线性，可能会导致对真实HCP的高估或不确定的HCP浓度。本试剂盒中使用的抗体与原试剂盒中使用的多克隆抗体相同，只是它经过了额外的亲和吸收步骤以去除糖基化表位的抗体，并且比第一代毕赤酵母试剂盒更具特异性(F140)。

官网只撂下这么一段话，解释第二代(F640)和第一代(F140)的区别，哎...

hangzhouhdjy · 发表于 2022-1-10 10:52:38

每文发表于 2022-1-6 12:19
嗯嗯我们也用的是他们家的试剂盒目前还没碰到过这种情况看厂家咋说吧之前我用过瑞普利金的试剂盒 ...

厂家官网给出的说明，有些太过于形式化。个人认为，有强推第二代试剂盒的嫌疑

若然悠夏 · 发表于 2022-1-13 16:59:13

姣妹崽发表于 2022-1-7 10:44
BSA的试剂盒也有同样的问题，CYGNUS的厂家也给不出答复来，个人认为这个金标准是要破除的

从我们的检测数据看，用第一代试剂盒检测，样品越稀释结果越高，用第二代试剂盒检测，样品越稀释结果越低。即第二代试剂盒能实现样品的稀释线性，而第一代不能。

我们的产品是用毕赤酵母表达的，该宿主会造成糖基化的现象，正好对应厂家官网的介绍。我大胆地猜测，我们的产品因为有糖基化的效应了，出现了越稀释结果越大的情况，所以第一代试剂盒不适用。

18901792493 · 发表于 2022-2-22 11:03:56

若然悠夏发表于 2022-1-13 16:59
从我们的检测数据看，用第一代试剂盒检测，样品越稀释结果越高，用第二代试剂盒检测，样品越稀释结果越低 ...