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大肠杆菌表达的生物制品种子批质量控制

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发表于 2022-2-15 11:26:08 | 显示全部楼层 |阅读模式

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      2020版药典三部“生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制”中规定重组工程菌生产用菌种主种子批检定以下项目:一般应包括培养特性、菌落形态大小、革兰氏等染色方法镜检、对抗生素的抗性、生化反应、培养物纯度、全基因序列测定、目的产物表达量、透射电镜检查、目的基因序列测定、外源基因与宿主基因的检定、外源基因整合于宿主染色体的检定、外源基因拷贝数检定、整合基因稳定性试验、目标产物的鉴别、质粒的酶切图谱等项目。
      想问下其中对抗生素的抗性、生化反应等方法有没有相关的法规要求具体怎么检验?
      还有本公司的种子批检验中有种子活力检验一项,但是根据制定的sop去检验,保存时间长的种子活力不符合制定的质量标准。现在想对该方法进行改进,但是没有相关法规规定,各位前辈有没有相关的经验可以借鉴?
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药徒
发表于 2022-2-15 11:53:11 | 显示全部楼层
可以把效价法改成液相或者紫外检测,效价测出来结果不太准
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发表于 2022-2-18 15:49:42 | 显示全部楼层
1、抗生素检测,可用抗性平板。生化反应检测,应有专门的生化反应仪进行检测。
2、种子活力的标准应该非常宽。种子的初始活力应高于合格标准4个数量级以上。
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 楼主| 发表于 2022-2-21 15:29:07 | 显示全部楼层
andy辉01 发表于 2022-2-18 15:49
1、抗生素检测,可用抗性平板。生化反应检测,应有专门的生化反应仪进行检测。
2、种子活力的标准应该非常 ...

想请教一下,种子活力的检验方法有没有相关规定?
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发表于 2022-11-8 09:11:22 | 显示全部楼层
你好,老师,能不能把贵公司的种子质控标准和我分享一下,之前没做过。谢谢
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药徒
发表于 2023-1-18 16:47:00 | 显示全部楼层
请问一下你们公司种子批传代是什么部门负责的?生产还是检验
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 楼主| 发表于 2023-1-28 11:37:16 | 显示全部楼层
nikonpro 发表于 2023-1-18 16:47
请问一下你们公司种子批传代是什么部门负责的?生产还是检验

我们公司研发部和QC都做过
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发表于 2023-1-31 13:36:52 | 显示全部楼层
老师,请教一下,全基因序列测定 你们是如何做的?全基因序列是指的重组质粒的,还是重组工程菌的呢?我们是重组大肠杆菌,是需要将重组质粒的进行全序列测定吗?如果重组毕赤酵母是不是就要测酵母基因组了
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 楼主| 发表于 2023-1-31 17:14:27 | 显示全部楼层
微影 发表于 2023-1-31 13:36
老师,请教一下,全基因序列测定 你们是如何做的?全基因序列是指的重组质粒的,还是重组工程菌的呢?我们 ...

我们也是重组大肠杆菌,但是没做全基因测序,只是做了目的基因序列测定
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发表于 2023-2-1 09:21:48 | 显示全部楼层
邹权 发表于 2023-1-31 17:14
我们也是重组大肠杆菌,但是没做全基因测序,只是做了目的基因序列测定

恩恩!我们也是很纠结,目前将主库的质粒全序测序。老师还请教您一下,重组大肠杆菌外源基因拷贝数您是如何做的呢,是QPCR法吗,如果是QPCR法是选用的哪段基因做内参呢?
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 楼主| 发表于 2023-2-1 14:01:04 | 显示全部楼层
微影 发表于 2023-2-1 09:21
恩恩!我们也是很纠结,目前将主库的质粒全序测序。老师还请教您一下,重组大肠杆菌外源基因拷贝数您是如 ...

质粒拷贝数用的QPCR法,内参用的16s
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发表于 2023-2-6 10:50:53 | 显示全部楼层
邹权 发表于 2023-2-1 14:01
质粒拷贝数用的QPCR法,内参用的16s

好的,感谢
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