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楼主: 锥锥
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[质量检验] 细胞产品的无菌检查(直接接种法)

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药徒
发表于 2022-12-4 15:12:05 | 显示全部楼层
锥锥 发表于 2022-11-29 14:21
接种很多管可以吗?管数越多肯定这种絮状物现象会越不明显,但接种管数多,样品在接种过程中被污染的风险 ...

加微信探讨一下 lingze736
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药徒
发表于 2022-12-5 22:13:43 | 显示全部楼层
这个问题简单的,细胞质量产品大部分无菌直接接种法都是每支培养基接种1ml细胞产品,培养基体积15ml左右,市场上有20ml或25ml容积的无菌离心管,用这种就不会有那么多空气和氧化层了。
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 楼主| 发表于 2022-12-10 22:44:11 来自手机 | 显示全部楼层
牧童1 发表于 2022-12-05 22:13
这个问题简单的,细胞质量产品大部分无菌直接接种法都是每支培养基接种1ml细胞产品,培养基体积15ml左右,市场上有20ml或25ml容积的无菌离心管,用这种就不会有那么多空气和氧化层了。

试过30毫升的无菌离心管,氧化层不行的
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药徒
发表于 2022-12-12 16:54:58 | 显示全部楼层
锥锥 发表于 2022-12-10 22:44
试过30毫升的无菌离心管,氧化层不行的

考虑下二十毫升的呀
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药徒
发表于 2022-12-14 08:57:36 | 显示全部楼层
木公1 发表于 2022-12-12 16:54
考虑下二十毫升的呀

对的,我的意思就是买点20ml的试用一下,就没有那么多氧化层了
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发表于 2022-12-14 10:31:50 | 显示全部楼层
容器看看能不能优化,以前我们是直接接种到商业化的培养基中,不会有分装容器的操作;
还有就是你的絮状物,细胞类的很正常,这种絮状物不会随时间有所扩增,参考药典最好在培养结束后再做一次转接,判断是否有菌,这样的流程才更经得起挑战。
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 楼主| 发表于 2022-12-21 12:06:13 来自手机 | 显示全部楼层
Shawn001 发表于 2022-12-14 10:31
容器看看能不能优化,以前我们是直接接种到商业化的培养基中,不会有分装容器的操作;
还有就是你的絮状物,细胞类的很正常,这种絮状物不会随时间有所扩增,参考药典最好在培养结束后再做一次转接,判断是否有菌,这样的流程才更经得起挑战。

你们之前用的什么商业化培养基?在培养期间,养化层能符合药典要求吗?
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发表于 2022-12-22 14:42:58 | 显示全部楼层
锥锥 发表于 2022-12-21 12:06
你们之前用的什么商业化培养基?在培养期间,养化层能符合药典要求吗?

BD的商业化培养基;开封前有氮气保护,使用时需要有一个开塞的操作,培养期间氧化层是符合要求的。
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 楼主| 发表于 2022-12-26 11:52:03 来自手机 | 显示全部楼层
Shawn001 发表于 2022-12-22 14:42
BD的商业化培养基;开封前有氮气保护,使用时需要有一个开塞的操作,培养期间氧化层是符合要求的。

用的瓶装还是管装的?装量有100毫升吗?我们现在用的三药的玻璃瓶装的胶塞铝盖轧盖的培养基,装量100毫升,也是充氮保护的,培养结束氧化层符合规范,但是有一个问题是有的胶塞打开后就盖不严了,会自己弹起来
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发表于 2022-12-27 08:47:19 | 显示全部楼层
锥锥 发表于 2022-12-26 11:52
用的瓶装还是管装的?装量有100毫升吗?我们现在用的三药的玻璃瓶装的胶塞铝盖轧盖的培养基,装量100毫升 ...

瓶装100mL,你可以用封口膜包一下,你的跳塞是方法确认的时候吧,无菌性培养阶段理论上不会跳塞,实在不行就换个厂家的试一下。
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 楼主| 发表于 2022-12-27 12:24:11 来自手机 | 显示全部楼层
Shawn001 发表于 2022-12-27 08:47
瓶装100mL,你可以用封口膜包一下,你的跳塞是方法确认的时候吧,无菌性培养阶段理论上不会跳塞,实在不行就换个厂家的试一下。

明白了,谢谢,我们现在就是把有跳塞可能的瓶子缠上封口膜。感觉这种情况还有有很大风险的,万一培养期间跳塞造成假阳性,就很麻烦。还有就是加样前的开塞放氮气的步骤风险也很大,开塞的瞬间,瓶口气流会迅速交换,会不会存在被污染的气体被带入瓶内的风险呢?
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发表于 2022-12-27 20:21:53 | 显示全部楼层
锥锥 发表于 2022-12-27 12:24
明白了,谢谢,我们现在就是把有跳塞可能的瓶子缠上封口膜。感觉这种情况还有有很大风险的,万一培养期间 ...

你的开塞操作不是在B+A或者隔离器里面开展的嘛,除非背景污染,而且有气流交换很正常啊,我认为开塞的瞬间,瓶口气流会迅速交换不算一个风险点,除非你隔离器漏了,那也是隔离器的缺陷,跟你的操作无关,如果你层流下都有污染的风险,那所有在下面的操作都是需要评估的。
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