流式细胞仪一些小问题

zliying

本人新入职医药检测方面，很多基本问题不太了解，这次就流式细胞仪请教一下各位大佬！！！
1.同型对照一直不理解是什么？可以具体举例嘛？
2.在选择用相同抗体但是不同通道时候，结果相差较大，请问是什么原因导致呢？
3.有时候相对于阴性对照来说（没有染色组），染色组中的阴性群会右移是什么原因导致的呢？




谢谢大家！！！

missu（ZY、）

1、同型抗体的意义是为了排除抗体带来的背景干扰，确定阴性和弱阳/阳性区的界限。
2、不确定你的是单染还是混染，混染的话看看补偿是否正确了，或者是两个抗体的浓度是否一致，或者做个抗体滴定看看是否是最佳的分离效果。
3、因为未染色组只有细胞的本底荧光信号，染色组除了细胞本底外，还有各自通道的背景荧光信号。

CHLuo8

3中的问题，我们经常遇到

来自安卓APP客户端

曹建甫

1、同型对照：抗体结合抗原是特异性结合，但也会非特异性结合（这部分检测结果就是“多”出来的，不是正确的），怎么排除这部分非特异结合呢，用同型对照（和你用的抗体一样，可以和检测 的细胞非特异性结合但不能特异性结合），所以用检测的结果-同型对照的结果=实际的结果。就是这个意思，具体的原理不就解释了，很麻烦。
2、不同通道相同抗体，检测出来的应该相同。不同通道荧光强度不同，如果你检测的细胞抗原本身表达非常高，不同通道也不会有差别。如果表达很低，比如表达百分之几又两个峰分不开，这时，你就该选择荧光强度最强的通道，比如PE的，这样两个峰才能分开，才好确定结果，再加上经验不足，很容易分析的结果不对。
3、然色组阴性部分右移，不正好说明细胞还是有一些非特异性结合的嘛，对比阴性对照组和同型对照组可以看出区别，这也是为什么要用同型对照的意义。

非澜

我也有同样的疑问

17633078921

曹建甫 发表于 2023-7-19 16:27
1、同型对照：抗体结合抗原是特异性结合，但也会非特异性结合（这部分检测结果就是“多”出来的，不是正确 ...

麻烦请教一下，我们在流式检测过程中同样的抗体，使用FITC和APC检测出来的值差别特别大（40%和90%），而且APC检测到的MFI值比FITC要高一个数量级，请问遇到这种情况应该怎么办，我们应该以哪个检测结果为准呀