菌种保藏甘油管怎么制备呢

Ponf413g49 · 发表于 2024-5-16 11:32:36

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现在知道的实验室一般用的几种菌种保藏方式，甘油管、瓷珠以及斜面
请教下，甘油管怎么制备呢？用什么管，甘油浓度是多少，多少温度大概能保存多久呢？另外如果做保存时间验证，这个验证是要怎么做呢？

我问题好多

江湖中相望 · 发表于 2024-5-16 13:22:21

制备甘油管：

1.在无菌条件下操作。
2.通常使用1.5 ml或2 ml的冻存管。
3.在每个管中加入含有20%-50%的甘油。
4.将菌种悬液和甘油混合均匀后，分装到冻存管中。
5.快速冷冻或置于-80°C冷冻保存。

八档丶电风扇 · 发表于 2024-5-16 14:34:08

甘油冻存管-70℃一下保存个5-10年没什么大问题，
至于有效期验证，
一个是活性检测，检查微生物能否正常复苏，浓度是否与初始浓度相差太大，
二就是菌种鉴定，检查菌种在保存过程是否发生变异，
一般每三个月或者每半年做一次检验，日常使用可以和验证同步进行。

Ponf413g49 · 发表于 2024-5-16 14:45:46

江湖中相望发表于 2024-5-16 13:22
制备甘油管：

1.在无菌条件下操作。

学习了，谢谢好心人

Ponf413g49 · 发表于 2024-5-16 14:47:44

八档丶电风扇发表于 2024-5-16 14:34
甘油冻存管-70℃一下保存个5-10年没什么大问题，
至于有效期验证，
一个是活性检测，检查微生物能否正常 ...

保存前时不要做纯度鉴定，也就是菌种鉴定吧
那纯度鉴定就是做革兰氏染色，看看有没有杂菌吗？那需要做多少平行呢，还是只用做一个革兰氏染色就行了

Ponf413g49 · 发表于 2024-5-16 14:49:20

江湖中相望发表于 2024-5-16 13:22
制备甘油管：

1.在无菌条件下操作。

你好，请问这个甘油管的甘油的含量是自己定的对吗？
这个20%的甘油的意思就是20%甘油和80%生理盐水对吗？

八档丶电风扇 · 发表于 2024-5-16 14:50:04

Ponf413g49 发表于 2024-5-16 14:47
保存前时不要做纯度鉴定，也就是菌种鉴定吧
那纯度鉴定就是做革兰氏染色，看看有没有杂菌吗？那需要做多 ...

要、每一批建库的菌种都需要做一次鉴定、至于做到哪种程度，就要看你们的公司性质和条件了，一般做无菌制剂的一般鉴定到种，做个染色或者生化实验也都能接受，反正药典只要求了做确定。不用做平行、抽一支来做就好了

Ponf413g49 · 发表于 2024-5-16 14:59:18

八档丶电风扇发表于 2024-5-16 14:50
要、每一批建库的菌种都需要做一次鉴定、至于做到哪种程度，就要看你们的公司性质和条件了，一般做无菌制 ...

好的，谢谢噢

八档丶电风扇 · 发表于 2024-5-16 15:02:28

Ponf413g49 发表于 2024-5-16 14:49
你好，请问这个甘油管的甘油的含量是自己定的对吗？
这个20%的甘油的意思就是20%甘油和80%生理盐水对吗 ...

一般用菌悬液和40%甘油（甘油+水）1:1混合成20%甘油冻存管

八档丶电风扇 · 发表于 2024-5-16 15:03:30

Ponf413g49 发表于 2024-5-16 14:49
你好，请问这个甘油管的甘油的含量是自己定的对吗？
这个20%的甘油的意思就是20%甘油和80%生理盐水对吗 ...

一般用菌悬液和40%甘油（甘油+水）1:1混合成20%甘油冻存管

Ponf413g49 · 发表于 2024-5-16 15:38:31

八档丶电风扇发表于 2024-5-16 15:03
一般用菌悬液和40%甘油（甘油+水）1:1混合成20%甘油冻存管

收到，谢谢

wangqi123 · 发表于 2024-5-16 16:23:25

甘油30-50%，看保存效果

Ponf413g49 · 发表于 2024-5-17 08:48:56

wangqi123 发表于 2024-5-16 16:23
甘油30-50%，看保存效果

好滴，谢谢

Ponf413g49 · 发表于 2024-5-17 08:50:03

八档丶电风扇发表于 2024-5-16 15:03
一般用菌悬液和40%甘油（甘油+水）1:1混合成20%甘油冻存管

你好，我还想请教下，甘油管一般适用于哪些菌呢？甘油管不适合的需要用什么方法保存呢

八档丶电风扇 · 发表于 2024-5-17 08:54:07

Ponf413g49 发表于 2024-5-17 08:50
你好，我还想请教下，甘油管一般适用于哪些菌呢？甘油管不适合的需要用什么方法保存呢

常用的菌都没问题，包括厌氧菌

Ponf413g49 · 发表于 2024-5-17 09:44:36

八档丶电风扇发表于 2024-5-17 08:54
常用的菌都没问题，包括厌氧菌

哦哦好的，那铜绿假单细胞菌这个也是可以用甘油管，只是这个的保存温度是常温保存即可对吧

八档丶电风扇 · 发表于 2024-5-17 09:48:50

Ponf413g49 发表于 2024-5-17 09:44
哦哦好的，那铜绿假单细胞菌这个也是可以用甘油管，只是这个的保存温度是常温保存即可对吧

不是、铜绿用斜面或者平皿是常温、但是冻存管还是-30℃以下，不然放不久的，所有的冻存管都是-30℃以下保存

Ponf413g49 · 发表于 2024-5-17 14:00:43

八档丶电风扇发表于 2024-5-17 09:48
不是、铜绿用斜面或者平皿是常温、但是冻存管还是-30℃以下，不然放不久的，所有的冻存管都是-30℃以下保 ...

哦哦好的~