发酵液长菌

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生物制品单抗，规模200L各项监测指标都正常，同样物料相同供应商，扩到2000L规模时，上到2000L罐发酵液就长菌，过程中使用的都是一次性袋子，也是无菌连接和转移，请问各位老师这个长菌调查思路应该是什么？最有可能出问题的点在哪里

懒鱼君君

配液和转移方式都一致的话，先查袋子完整性、电极插口、取样口。搅拌桨如果是磁力耦合控制的，也要看一下有没有摩擦损伤，还有如果培养过程泡沫多，接触到排气口也有染菌风险。还有空气管路也不是200L管路吧，这段管路是不是有问题，空气滤器做下完整性看看。
然后正常的话应该会预先打空培养基平衡一天吧，不行就多平衡一两天看长不长菌，不长的话2000L系统本身应该没问题
200L也可以留点样取出来放摇瓶培养观察一下，有可能前期指数期细胞生长旺盛，杂菌不占优势没体现出来，上2000L 10倍扩增，细胞被稀释后一下子被打败了
反正就是找差异，每个环节逐一分析吧

hanmenglei

关注点是2000L是不是一次性袋子，如果不是，需要分析，第二点如果是赛多反应器，电极是一次性的可以不用分析电极的事情，2000L污染多少批次，如果只是一批次可以重新再试一下，2批次以上就算了，分析过滤器与袋子连接比较好，另外就是接种后多长时间污染，接种前200L取样是否无菌保存，2000L取样方式是什么？无菌取样器，还是多连取样袋？建议这几个方向，第三就是，空气滤器使用后完整型检测一下

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hanmenglei 发表于 2025-4-3 13:43
关注点是2000L是不是一次性袋子，如果不是，需要分析，第二点如果是赛多反应器，电极是一次性的可以不用分 ...

不是赛多的反应器，三批，每批都是十天左右就开始长菌，200L时检测无菌都没有问题，2000L和200L取样方式是一样的保存及运输方式都一样。

18310896012

懒鱼君君 发表于 2025-4-3 13:37
配液和转移方式都一致的话，先查袋子完整性、电极插口、取样口。搅拌桨如果是磁力耦合控制的，也要看一下有 ...

上2000L，稀释后为什么容易染菌？

懒鱼君君

18310896012 发表于 2025-4-3 15:11
上2000L，稀释后为什么容易染菌？

只是一个怀疑点，实际的可能性很小，因为细胞想和细菌竞争还是有点难。
但是我之前做细菌培养的时候，也会出现原始菌就带杂菌，但是指数期看不出来，到培养中后期才发现染菌。
看你说是连续三批培养10天左右染菌，那基本排除早期染菌的可能得，因为不会到10天才体现出来。建议重点看补料、中控取样口、排气口（如果有泡沫）、袋子是否有渗液。尤其是袋子的渗液，你们拆下来用过的袋子好好检查一下，有些袋子的密封性不太好。

hanmenglei

1233213疯疯癫癫说

hanmenglei

18310896012 发表于 2025-4-3 15:11
上2000L，稀释后为什么容易染菌？

因为，用的是不锈钢反应器，补料，取样，等等都有可能有风险，具体原因应该是设计灭菌过程有死角，不彻底，或者部件安装设计有死角，这个不好分析，还有可能就是有些三通取样阀离线灭菌不彻底造成的污染，这些都是无法预知分析的地方，永远分析不到理论点，只能碰运气，一次成功之后，就不再改动就不会出问题，