纯化水微生物限度检查方法

十八闲

想问一下25版改版后纯化水的取样量大家做的是多少的，药典上规定的1ml，薄膜过滤的冲洗量100ml，是不是也就可以直接冲100ml的纯化水，还有洋葱伯克霍尔德菌群到底要不要检这一问题，大家怎么看，有没有大神能借鉴参考一下纯化水微生物限度检查方案

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你提到的问题非常关键，涉及2025年《中国药典》纯化水微生物限度检查的新规范执行，下面我们来一条条澄清和分析，并结合行业通行做法，给你几个可参考的操作建议。 [hr] 1. 纯化水微生物检查的取样量与冲洗量 药典原文（2025年）参考（四部微生物限度检查法）： [*]纯化水微生物限度检查：“使用不少于1 mL供试品，采用薄膜过滤法，必要时可稀释。” [*]薄膜过滤法：“用无菌缓冲液冲洗薄膜表面，体积一般为100mL。” [hr] 实际操作中的行业常规做法（参考GMP企业）：结论： 药典最低限度是1 mL，但大部分企业常规做100~250mL以保证灵敏度，特别是GMP系统或出口品种，常选100mL。 [hr] 2. 洋葱伯克霍尔德菌群（Burkholderia cepacia complex，BCC）是否必须检？ 药典中明确指出：2020版/2025版《药典》中未对纯化水要求检BCC； 但在： [*]《药品GMP附录——无菌药品》 [*]ICH Q6A / Q6B [*]FDA / EMA 指南 中提出，在使用纯化水生产无菌药品、含防腐剂制剂、口服液体制剂时，应评估是否监测该类特殊菌种。 [hr] 行业观点与趋势：⚠️结论： 虽然不是药典强检菌种，但如果你单位产品具有一定风险（如口服液体制剂、糖浆剂、眼用制剂等），建议至少在开发阶段做BCC监测验证，生产中按风险视情况加入常规监测。 [hr] 3. 可借鉴的“纯化水微生物限度检查方案”简要框架（参考用）以下是一份行业常规的检查方案（适用于厂用纯化水系统）： 【纯化水微生物限度检查方案要点】[hr] 最后建议 [*]采样体积：尽量使用**≥100mL**，以满足灵敏度要求；“1mL”仅为最低要求，不建议用于常规微检； [*]BCC菌群：根据产品风险决定是否检测，不做不算违规，但对于口服液、无菌制品有推荐趋势； [*]方法验证：建议建立完整的纯化水微生物检测方法学验证，包括回收率、检测限、干扰因子等。 [hr]

• 世间始终你好
• 发表于2025-07-24
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可亲可爱

检测方法不是验证过的吗？当初验证规定取多少就多少啊，怎么可以随便修改呢？

十八闲

可亲可爱 发表于 2025-7-24 10:43
检测方法不是验证过的吗？当初验证规定取多少就多少啊，怎么可以随便修改呢？

之前一直是1ml至皿再倾注培养基，现在才准备换薄膜过滤

可亲可爱

十八闲 发表于 2025-7-24 10:59
之前一直是1ml至皿再倾注培养基，现在才准备换薄膜过滤

方法换了，新方法没做验证吗？

不见猫骨头

关于洋葱伯克霍尔德菌群是不是需要检测，你可看看《非无菌化学药品及原辅料微生物限度研究技术指导原则（试行）》，比较官方的，有明确规定的哪些种类需要检测的文件，我好像只找到这个

十八闲

可亲可爱 发表于 2025-7-24 11:06
方法换了，新方法没做验证吗？

现在就是在准备写验证文件，自己看药典有点弄不明白

世间始终你好

你提到的问题非常关键，涉及2025年《中国药典》纯化水微生物限度检查的新规范执行，下面我们来一条条澄清和分析，并结合行业通行做法，给你几个可参考的操作建议。

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1. 纯化水微生物检查的取样量与冲洗量 药典原文（2025年）参考（四部微生物限度检查法）：

• 纯化水微生物限度检查：“使用不少于1 mL供试品，采用薄膜过滤法，必要时可稀释。”
  
• 薄膜过滤法：“用无菌缓冲液冲洗薄膜表面，体积一般为100mL。”
  
  

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实际操作中的行业常规做法（参考GMP企业）：目的样品量说明
微生物检查样品体积100mL或250mL 常见，部分公司做500mL虽药典写“≥1mL”，但1mL过小，实际检测效果差，且不能满足常规微生物检测灵敏度。通常采用100mL以上才能检出低水平污染
薄膜冲洗液100mL无菌PBS或生理盐水（冲两次各50mL）参照药典推荐值，一般不会改
样品处理方式直接过滤 or 预稀释后过滤如水质洁净度较差、含有不溶性颗粒，可能预过滤或稀释后上样

结论：
药典最低限度是1 mL，但大部分企业常规做100~250mL以保证灵敏度，特别是GMP系统或出口品种，常选100mL。

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2. 洋葱伯克霍尔德菌群（Burkholderia cepacia complex，BCC）是否必须检？ 药典中明确指出：2020版/2025版《药典》中未对纯化水要求检BCC；
但在：

• 《药品GMP附录——无菌药品》
  
• ICH Q6A / Q6B
  
• FDA / EMA 指南
  中提出，在使用纯化水生产无菌药品、含防腐剂制剂、口服液体制剂时，应评估是否监测该类特殊菌种。
  
  

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行业观点与趋势：场景是否检测BCC（洋葱伯克霍尔德）
一般化学药品片剂、胶囊 通常不检
口服液体制剂、糖浆、含防腐剂溶液 越来越多公司主动加入BCC筛查
用于制备注射剂的纯化水或水系统 如作中间水使用，大厂也会检
风险导向企业（GMP意识高） 纳入微生物控制菌库（e.g. 阴性对照菌）

⚠️结论：
虽然不是药典强检菌种，但如果你单位产品具有一定风险（如口服液体制剂、糖浆剂、眼用制剂等），建议至少在开发阶段做BCC监测验证，生产中按风险视情况加入常规监测。

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3. 可借鉴的“纯化水微生物限度检查方案”简要框架（参考用）以下是一份行业常规的检查方案（适用于厂用纯化水系统）：
【纯化水微生物限度检查方案要点】项目内容
采样频率日采（关键使用点）/ 周采 / 月采（全系统）
采样量常规：100mL（常温采样）
检测方法薄膜过滤法（0.45μm滤膜），37℃培养5天
冲洗液PBS或0.9%NaCl，分两次冲洗，每次50mL
检测菌种（开发阶段或确认）除菌总数外，可加入特定菌种如：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、洋葱伯克霍尔德等
监测点位末端使用点、循环点、储罐出水、系统回水口等
限度标准微生物限度：<100CFU/mL（依据药典），如用于注射剂则需灭菌级水

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最后建议

• 采样体积：尽量使用**≥100mL**，以满足灵敏度要求；“1mL”仅为最低要求，不建议用于常规微检；
  
• BCC菌群：根据产品风险决定是否检测，不做不算违规，但对于口服液、无菌制品有推荐趋势；
  
• 方法验证：建议建立完整的纯化水微生物检测方法学验证，包括回收率、检测限、干扰因子等。
  
  

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凯rq8rec5y

直接100ml过滤

sun°

凯rq8rec5y 发表于 2025-7-24 13:16
直接100ml过滤

那直接过滤100ml 结果出具每毫升吗  还是每100ml

凯rq8rec5y

sun° 发表于 2025-7-24 16:48
那直接过滤100ml 结果出具每毫升吗  还是每100ml

CFU/100mL 每100ml记菌落数

路路vvr

凯rq8rec5y 发表于 2025-7-24 16:50
CFU/100mL 每100ml记菌落数

那质量标准按100cfu/ml定还是怎么定？

凯rq8rec5y

路路vvr 发表于 2025-8-9 17:01
那质量标准按100cfu/ml定还是怎么定？

标准还是100cfu/ml

凯rq8rec5y

凯rq8rec5y 发表于 2025-7-24 16:50
CFU/100mL 每100ml记菌落数

过滤100ml长菌5个，那就是5cfu/100ml

凯rq8rec5y

凯rq8rec5y 发表于 2025-8-11 10:39
过滤100ml长菌5个，那报告写5cfu/100ml

然后再换算为cfu/ml， 5cfu/100ml换算就是 0.05cfu/ml

Onexzr

凯rq8rec5y 发表于 2025-8-11 10:46
然后再换算为cfu/ml， 5cfu/100ml换算就是 0.05cfu/ml

报告能出小数点的数值吗